大腸ポリポーシス患者の遺伝学的検討ー新たなサーベイランスの確立を目指してー

结直肠息肉病患者的基因研究 - 旨在建立新的监测 -

• 批准号: 21K16437
• 负责人: 高雄 美里
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Hospital Organization Tokyo Metropolitan Komagome Hospital
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16437/
• 关键词: ポリポーシス; 体細胞モザイク; 家族性大腸腺腫症; 遺伝性腫瘍; FAP; デスモイド腫瘍; 十二指腸腺腫; APC遺伝子; モザイク; 大腸癌

本年度より本格的に研究開始となった。当院で大腸ポリポーシスに対してサーベイランスを行っている32例を対象とした。対象症例に対し、患者血液を用いて次世代シークエンサーによるポリポーシス原因遺伝子（APC, AXIN2, GREM1, MUTYH, MSH3, NTHL1,POLE, POLD1, RNF43）の検索を行った。必要に応じてMLPA法やサンガーシークエンスを行った。APC遺伝子の病的バリアントが同定された症例は14例、MUTYH遺伝子の病的バリアントが同定された症例が1例であった。残りの17例に関しては血液を用いた遺伝学的検査では明らかな原因遺伝子は同定できなかった。上記検索でバリアントが同定されなかった症例のうち大腸ポリープの組織採取が可能であった症例において体細胞モザイクの検索を行った。大腸内視鏡施行時に採取した大腸生検検体からQIAamp DNA mini kitを用いてDNAを抽出し、APC遺伝子のバリアントを検索した。異なる2か所以上で同様のバリアントが同定された場合をAPC体細胞モザイクとした。今年度中に来院し検体採取に同意が得られた症例は1例であったが、本症例では異なる2か所の大腸生検からAPC c.896_897delCTのバリアントが同定され、体細胞モザイクと判断した。遺伝学的検査で明らかな原因遺伝子が同定されなかった症例のうち、過去に手術や内視鏡的切除の際に保存しているFFPE検体がある場合にはFFPEよりDNAを抽出し解析を行ったが、経過年数が長いほどDNAの回収率が悪く解析困難であった。患者同意のもと、新たな検体採取が望ましいと思われた。

今年，研究工作正式开始。研究对象为在我院接受结直肠息肉病监测的 32 名患者。对于目标病例，我们使用新一代测序仪使用患者血液来搜索引起息肉病的基因（APC、AXIN2、GREM1、MUTYH、MSH3、NTHL1、POLE、POLD1、RNF43）。必要时进行 MLPA 方法和 Sanger 测序。 14例APC基因致病性变异，1例MUTYH基因致病性变异。在其余 17 例中，血液基因检测未能识别出致病基因。在上述检索中未鉴定出变异的病例中，在可以采集结肠息肉组织的病例中，进行了体细胞嵌合体的检索。使用 QIAamp DNA 迷你试剂盒从结肠镜检查期间收集的结肠活检标本中提取 DNA，并搜索 APC 基因变异。 APC体细胞嵌合体被定义为在两个或多个不同位置鉴定出相似变异的情况。本财年有一个案例获得了样本采集的同意，但在该案例中，从两个不同的结肠活检中鉴定出 APC c.896_897delCT 变异，并确定其为体细胞嵌合体。在通过基因检测未确定明确致病基因的情况下，如果有以前手术或内窥镜切除术中保存的 FFPE 标本，则从 FFPE 中提取 DNA 并进行分析。但是，时间越长，概率越低。 DNA回收率和分析难度。在患者同意的情况下收集新标本似乎是可取的。