Crosstalk between GATA3+ regulatory T cells and renal resident cells in crescentic glomerulonephritis

新月体肾小球肾炎中 GATA3 调节性 T 细胞与肾常驻细胞之间的串扰

基本信息

批准号：
21K16291
负责人：
酒井亮太
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Saitama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

腎炎回復期に出現するGATA3陽性組織制御性T細胞(Treg)の特徴の把握するために蛍光試薬SPiDER-βGal(株式会社同仁化学研究所)を用いて、1細胞レベルでの解析を目指した。しかし、フローサイトメトリー解析ではConventional T細胞でGATA3陽性のうち、β-galactosidase陽性細胞は約60%に、さらにGATA3陽性Tregのうちβ-galactosidase陽性細胞は約10-20%にとどまった。また組織解析でも自家蛍光との区別が困難で、明確にGATA3陽性Tregを区別できないと判断した。従って、GATA3陽性Tregのbulkもしくはsingle cell RNA-seq解析は施行できなかった。このため、まずin vitroでのGATA3陽性Tregの誘導を試みた。脾臓から単離したTregはCD3/CD28刺激なしでIL-2およびIL-33によりGATA3が強く発現することを明らかにした。Foxp3を発現しないConventional T細胞をIL-4およびIL-2のいわゆるTh2条件でTCR刺激をしたところ、TCR刺激を減らしていくと段階的にGATA3の発現は減少した一方で、TregにおいてはConventional T細胞の増殖に必要な程度のTCR刺激を加えたものは逆にGATA3の発現が抑制され、Foxp3を失ったexTregが増加した。しかし、TCR刺激を段階的に減らしていくとある程度の「強すぎないTCR刺激」ではexTregは増加せず、TCR刺激無しと比較してGATA3陽性Tregが増加することを明らかにした。腎固有細胞としてHatje FA, et al. J Am Soc Nephrol. 2021に従い、メサンギウム細胞、血管内皮細胞、足細胞のソーティングし、発現遺伝子についてRT-PCRで確認した。各々細胞培養が可能となった。

为了了解肾炎恢复期出现的GATA3阳性组织调节性T细胞（Treg）的特征，我们旨在使用荧光试剂SPiDER-βGal（Dojindo Laboratories，Inc.）在单细胞水平上对其进行分析。）。然而，在流式细胞术分析中，GATA3阳性的常规T细胞中只有约60%是β-半乳糖苷酶阳性细胞，而且，GATA3阳性Treg中只有约10-20%是β-半乳糖苷酶阳性细胞。此外，在组织分析中很难与自发荧光区分开，并且确定不能清楚地区分GATA3阳性Treg。因此，无法对 GATA3 阳性 Tregs 进行批量或单细胞 RNA-seq 分析。为此，我们首先尝试在体外诱导 GATA3 阳性 Tregs。我们发现从脾脏分离的Tregs在没有CD3/CD28刺激的情况下通过IL-2和IL-33强烈表达GATA3。当不表达Foxp3的常规T细胞在IL-4和IL-2的所谓Th2条件下用TCR刺激时，GATA3表达随着TCR刺激的减少而逐渐减少，而Tregs中的常规T细胞相反，当TCR刺激时，GATA3表达逐渐下降。施加到细胞增殖所需的程度后，GATA3 表达受到抑制，缺乏 Foxp3 的 exTreg 增加。然而，当TCR刺激逐渐减少时，exTregs在一定程度上并没有随着“不太强的TCR刺激”而增加，但GATA3阳性Tregs与没有TCR刺激相比有所增加。作为肾脏特异性细胞，系膜细胞、血管内皮细胞和足细胞根据 Hatje FA 等人 J Am Soc Nephrol 2021 进行分类，并通过 RT-PCR 确认表达的基因。细胞培养对每个人来说都已成为可能。

项目成果

期刊论文数量（8）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Tissue resident GATA3+ regulatory T cells regulated by the IL-33-ST2 axis and amphiregulin play roles in the convalescence stage of crescentic glomerulonephritis.

受 IL-33-ST2 轴和双调蛋白调节的组织驻留 GATA3 调节性 T 细胞在新月体肾小球肾炎的恢复期发挥作用。

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Ryota Sakai;Koichi Amano
通讯作者：
Koichi Amano

AI(人工知能)で迫る、顔認識による膠原病疾患の新たな診断補助ツールの開発

利用AI（人工智能）进行面部识别，开发胶原蛋白疾病的新型诊断辅助工具

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
4.酒井亮太;吉永正一;岡田悠介;柴田明子;倉沢隆彦;近藤恒夫;天野宏一
通讯作者：
天野宏一

Systematic review and meta-analysis for 2023 clinical practice guidelines of the Japan Research Committee of the Ministry of Health, Labour, and Welfare for Intractable Vasculitis for the management of ANCA-associated vasculitis

日本厚生劳动省难治性血管炎研究委员会 2023 年临床实践指南对 ANCA 相关血管炎管理的系统回顾和荟萃分析

DOI：
10.1093/mr/roac114
发表时间：
2022
期刊：
Modern Rheumatology
影响因子：
2.2
作者：
Watanabe Ryu;Oshima Megumi;Nishioka Norihiro;Sada Ken-Ei;Nagasaka Kenji;Akiyama Mitsuhiro;Ando Taiki;Higuchi Tomoaki;Inoue Yoshino;Kida Takashi;Mutoh Tomoyuki;Nakabayashi Akihiko;Onishi Akira;Sakai Ryota;Waki Daisuke;Yamada Yosuke;Yajima Nobuyuki;Tamura N
通讯作者：
Tamura N

ループス腎炎に対するシクロホスファミド・タクロリムス併用療法の有用性と安全性

环磷酰胺和他克莫司联合治疗狼疮性肾炎的有效性和安全性