MPN発症のカギを握る巨核球：患者骨髄環境における腫瘍性巨核球の働きとは？

巨核细胞是 MPN 发病的关键：肿瘤性巨核细胞在患者骨髓环境中的作用是什么？

• 批准号: 21K16275
• 负责人: 奥田 真帆
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16275/
• 关键词: 骨髄増殖性腫瘍; MPN; 巨核球; RNA-seq; 網羅的遺伝子発現解析; 骨髄線維化

骨髄増殖性腫瘍 (MPN) は、造血幹細胞にドライバー遺伝子変異が生じた結果、末梢血中の特定の血球の異常な増加や、骨髄の線維化が生じる造血器腫瘍である。患者骨髄では、血小板の前駆細胞である成熟巨核球の著しい増加や形態異常が観察されることから、ドライバー遺伝子変異を獲得した造血幹細胞が分化することで産生された腫瘍性巨核球がサイトカインやエクソソームの産生を介してMPNの病態形成に関与していると考えられている。本研究では、こうした腫瘍性巨核球が、骨髄増殖性腫瘍 (MPN) の発症において果たす役割を解明することを目的としており、これまでにMPN患者骨髄から単離した成熟巨核球についてRNA-seq解析を実施した。今年度は、RNA-seq解析によって同定された、MPN患者由来の成熟巨核球に特異的に発現する遺伝子（MPN発現遺伝子）について、MPN発症との関連を解析した。まずRT-qPCR法によりMPN患者由来の巨核球においてこれらの遺伝子が発現していることを確認した。次に、MPN患者末梢血から単離したCD34陽性造血幹細胞を培地中で分化誘導した結果、分化した巨核球においてMPN発現遺伝子の発現を検出した。そこで、同様の造血幹細胞におけるMPN発現遺伝子の発現をRNA干渉法により抑制し、上記in vitro分化誘導モデルを用いて巨核球分化への影響を評価した。さらに、MPN発症モデルマウスから血小板を採取し、MPN発現遺伝子についてRT-qPCR法により発現量を解析した。

骨髓增生性肿瘤（MPN）是造血肿瘤，由于造血干细胞的驱动基因突变，外周血和骨髓纤维化的某些血细胞异常增加。在骨髓中，观察到成熟的巨核细胞的显着增加和形态异常，这些巨核细胞是血小板祖细胞的，被认为与细胞因子和外泌体的产生有关MPN病理学的形成与MPN病理形成有关。这项研究旨在阐明这些肿瘤性巨核细胞在骨髓增生性肿瘤（MPN）发展中的作用，并对从MPN患者的骨髓中分离出的成熟巨核细胞进行RNA-SEQ分析。今年，我们分析了通过RNA-Seq分析鉴定的基因的MPN发展（表达MPN的基因）的关联，这些分析在MPN患者的成熟巨核细胞中特别表达。首先，RT-QPCR证实了这些基因是在MPN患者衍生的巨核细胞中表达的。接下来，在培养基中分化了从MPN患者外周血分离的CD34阳性造血干细胞，并在分化的巨核细胞中检测到表达MPN的基因的表达。因此，RNA干扰法抑制了表达MPN基因在相似的造血干细胞中的表达，并使用体外分化诱导模型评估了对巨核细胞分化的影响。此外，从MPN-发作模型小鼠收集血小板，并通过RT-QPCR方法分析表达MPN基因的表达水平。

项目成果

骨髄増殖性腫瘍におけるCREB3L1遺伝子の発現とその意義

CREB3L1基因在骨髓增殖性肿瘤中的表达及其意义

• 发表时间: 2021
• 作者: 奥田 真帆;荒木 真理人;Federico de Marchi;森下 総司;今井 美沙;森 洋輔;堀野 芽生;落合 友則;白根 脩一;枝廣 陽子;安藤 純;小松 則夫
• 通讯作者: 小松 則夫

Clinical relevance of CREB3L1 expression in Ph-negative MPN

Ph 阴性 MPN 中 CREB3L1 表达的临床相关性

• 发表时间: 2022
• 作者: Soji Morishita;Federico De Marchi;Maho Okuda;Misa Imai;Terumi Baba;Yosuke Mori;Chiho Furuya;Satoko Ogata;Yinjie Yang;Jun Ando;Miki Ando;Marito Araki;Norio Komatsu
• 通讯作者: Norio Komatsu

Quantitative measurement of mutant calreticulin in specimens of myeloproliferative neoplasm patients

骨髓增生性肿瘤患者标本中突变型钙网蛋白的定量测定

• 发表时间: 2021
• 作者: Ogata S;Araki M;Kihara Y;Okuda M;Morishita S;Imai M;Masubuchi N;Mori Y;Yang Y;Yoshikawa S;Ochiai T;Shirane S;Edahiro Y;Ando J;Komatsu N
• 通讯作者: Komatsu N

Specific expression of CREB3L1 in megakaryocyte in myeloproliferative neoplasms

CREB3L1在骨髓增殖性肿瘤巨核细胞中的特异性表达

• 发表时间: 2021
• 作者: Okuda M;Araki M;Federico M;Morishita S;Imai M;Mori Y;Horino M;Ando J;Komatsu N
• 通讯作者: Komatsu N