肝類洞閉塞症候群における血小板活性化受容体CLEC-2の役割解明

阐明血小板活化受体 CLEC-2 在肝窦阻塞综合征中的作用

• 批准号: 21K16266
• 负责人: 大竹 志門
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nihon University (2022)University of Yamanashi (2021)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16266/
• 关键词: 肝類洞閉塞症候群; CLEC-2; 血小板; ポドプラニン; Podoplanin; 類洞内皮細胞

本研究のテーマである肝類洞閉塞症候群(SOS)は、化学・放射線療法の合併症で、肝類洞内皮細胞(LSEC)障害に引き続く循環障害性肝障害を特徴とする。CLEC-2は血小板のみならずLSECにも発現することから、これらの細胞に共通して発現するCLEC-2が、SOSの病態に何らかの形で関与しているという仮説をたてた。これまでの研究実績として、C57BL/6マウスにおけるSOSモデルとしてモノクロタリン投与モデルの作製を試みたが、安定したモデル作製が不可能であった。C57BL/6マウスについては、6-チオグアニンによるSOSモデルも試したものの、こちらも同様にモデルは不安定であった。このため、ICRマウスにストレインを変更することとし、まずICRマウスにおけるCLEC-2除去について検討を行った結果、同マウスにおいてCLEC-2除去は4週まで可能であることが判明した。令和4年度は、ICRマウスにおいて安定したSOSモデルマウスを作製することを試みた。まず少数例のICRマウスに対して400 mg/kgの投与を行ったところ、半数以上が48時間を待たず安楽死基準に到達したため、300mg/kgを投与量として設定した。また肝障害を生じる化学物質によりLSECがポドプラニンを発現するという知見が報告されていることから、ICRマウスにおけるSOSモデルにおいてLSECがポドプラニンを発現するかどうか免疫染色において検討を行っている。また肝臓における各種RNA発現についてはqPCRで評価する方針とし、PBSによる還流を行った後肝臓をペッスル型ホモジナイザーでホモジナイズしtRNA抽出、cDNAへの逆転写を行いアルブミンなどについてqPCRを行った。

本研究的主题肝窦阻塞综合征（SOS）是放化疗的并发症，其特征是肝窦内皮细胞（LSEC）损伤后出现循环功能障碍。由于 CLEC-2 不仅在血小板中表达，也在 LSEC 中表达，因此我们假设通常在这些细胞中表达的 CLEC-2 在某种程度上参与了 SOS 的病理学。在我们之前的研究中，我们尝试在C57BL/6小鼠中创建野百合碱给药模型作为SOS模型，但不可能创建稳定的模型。对于C57BL/6小鼠，我们还尝试了使用6-硫鸟嘌呤的SO​​S模型，但该模型同样不稳定。因此，我们决定将品系改为ICR小鼠，并首先研究ICR小鼠中CLEC-2的去除，结果发现，在同一只小鼠中CLEC-2的去除可能长达4周。 2020年，我们尝试使用ICR小鼠创建稳定的SOS模型小鼠。首先，当对少数ICR小鼠给予400mg/kg时，48小时内超过一半的小鼠达到安乐死标准，因此将剂量定为300mg/kg。此外，据报道，由于化学物质导致肝损伤，LSEC 表达足足蛋白，因此我们正在使用免疫染色研究 ICR 小鼠 SOS 模型中 LSEC 是否表达足足蛋白。此外，我们决定通过qPCR评估肝脏中各种RNA的表达，用PBS回流后，用杵匀浆器匀浆肝脏，提取tRNA，反转录为cDNA，并对白蛋白进行qPCR ， ETC。

项目成果

CLEC-2 promotes IGF-1 secretion from PDPN+ stromal cells and positively regulates erythropoiesis

CLEC-2促进PDPN基质细胞分泌IGF-1并正向调节红细胞生成

• 发表时间: 2021
• 作者: Shimon Otake;Tomoyuki Sasaki;Toshiaki Shirai;Nagaharu Tsukiji; Katsuhiro Takano;Shogo Tamura;Yukio Ozaki;Katsue Suzuki-Inoue
• 通讯作者: Katsue Suzuki-Inoue