血小板による肺線維化増悪機構の統合的解明と臨床応用に向けた基礎的検討

全面阐明血小板引起肺纤维化加重的机制及临床应用基础研究

• 批准号: 22K08500
• 负责人: 築地 長治
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08500/
• 关键词: 血小板; 肺線維化; CLEC-2; GPVI; 肺繊維化; CLEC-2/PDPN; GPVI/collagen

我々は、肺発生において血小板活性化受容体CLEC-2とそのリガンドPdpnの相互作用がalveolar duct myofibroblastの分化を通じて正常な肺呼吸に寄与していることを明らかにしたが、出生後成長に伴って当該細胞は消失してしまう。我々は、成体において不適切なCLEC-2/Pdpnシグナルの活性化が肺線維化の原因となるmyofibroblastを生みだし、線維化を増悪させるではないかと考えた。そこで、ブレオマイシンによる特発性肺線維症のモデルマウスにおいて抗CLEC-2抗体によって血小板CLEC-2を消失させたところ、体重減少と死亡率の改善およびコラーゲン量の減少が認められた。しかしながら、この実験系に問題があり、それを回避して再度解析したところ肺線維化軽減効果は低下して有意な差が得られなかった。抗CLEC-2抗体は初回投与時に血小板減少を起こしたあと回復する血小板をCLEC-2欠損にすることができ、欠損中に再投与を行うと以降は血小板減少を起こさずにCLEC-2欠損維持期間を延長できる。通常週１回の投与で1か月ほど血小板CLEC-2欠損を維持できるが、特定の条件下（特に炎症が誘導される病態）では抗体の有効期間が短縮し、次回投与前に血小板CLEC-2の発現が回復してしまう。その状態で抗体投与を行うと初回投与時同様血小板減少を起こしてしまうことが判明した。これを考慮すると以前得られた抗CLEC-2抗体による肺線維化軽減効果は、血小板CLEC-2欠損に加えて血小板減少に起因する可能性が示唆された。そこで、計画を前倒して血小板減少モデルマウスのThpo欠損マウス、コラーゲン受容体GPVI欠損マウスの樹立を急ぐこととした。本学支援部署でCRISPR/Cas9で作製を試み、2遺伝子それぞれに複数系統の欠損マウスが得られ、現在実験可能な個体数を確保するべく繁殖を行っている。

我们已经表明，血小板激活的受体CLEC-2及其配体PDPN的相互作用通过分化肺泡管肌纤维细胞的分化有助于正常的肺呼吸，但这些细胞随后生长而消失。我们怀疑成人中CLEC-2/PDPN信号的不当激活会产生肌成纤维细胞，从而导致肺纤维化和加剧纤维化。因此，在由博来霉素引起的肺纤维化的小鼠模型中，通过抗CLEC-2抗体消除了血小板CLEC-2，体重减轻，死亡率的提高和胶原蛋白含量降低。但是，这个实验系统存在问题，当我们避免这种情况并再次分析时，减少肺纤维化的效果减少了，并且没有明显的差异。抗CLEC-2抗体会引起血小板在第一次给药期间血小板减少症后恢复的血小板，即CLEC-2缺乏症，如果在缺乏期间重新施加了不足，而不会引起血小板减少症。通常，每周一次，血小板CLEC-2缺乏症可以维持大约一个月，但在某些情况下（尤其是在诱发炎症的病理中），抗体的有效性缩短，并且在下一次给药之前还原血小板CLEC-2的表达。已经发现，当在该状态下施用抗体时，就会发生血小板减少症，就像第一个给药一样。考虑到这一点，已经提出先前获得的抗CLEC-2抗体可能是由于血小板减少症引起的，除了血小板CLEC-2缺乏症。因此，该计划是在列表前制定的，并用血小板减少型模型小鼠和胶原受体GPVI缺陷小鼠建立血小板减少小鼠。我们大学的支持部门试图使用CRISPR/CAS9生产小鼠，并为这两个基因中的每个基因获得了多种缺乏小鼠的菌株，并正在繁殖以确保可以进行实验的人群。

项目成果

癌関連線維芽細胞はCLEC-2/PDPNを介して癌関連血栓症を増悪させる

癌症相关成纤维细胞通过 CLEC-2/PDPN 加剧癌症相关血栓形成

• 发表时间: 2022
• 作者: 白井俊光;佐々木知幸;築地長治;大石沙織;横森良平;高野勝弘;井上克枝
• 通讯作者: 井上克枝

Platelets and Ferric Iron

血小板和三价铁

• 发表时间: 2023
• 作者: Tamura Shogo;Mukaide Masato;Katsuragi Yumi;Fujii Wataru;Odaira Koya;Suzuki Nobuaki;Tsukiji Nagaharu;Okamoto Shuichi;Suzuki Atsuo;Kanematsu Takeshi;Katsumi Akira;Takagi Akira;Ikeda Katsuhide;Ueyama Jun;Hirayama Masaaki;Suzuki-Inoue Katsue;Matsushita Tadash;Katsue Suzuki-Inoue
• 通讯作者: Katsue Suzuki-Inoue