血小板による肺線維化増悪機構の統合的解明と臨床応用に向けた基礎的検討

全面阐明血小板引起肺纤维化加重的机制及临床应用基础研究

• 批准号: 22K08500
• 负责人: 築地 長治
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08500/
• 关键词: 血小板; 肺線維化; CLEC-2; GPVI; 肺繊維化; CLEC-2/PDPN; GPVI/collagen

我々は、肺発生において血小板活性化受容体CLEC-2とそのリガンドPdpnの相互作用がalveolar duct myofibroblastの分化を通じて正常な肺呼吸に寄与していることを明らかにしたが、出生後成長に伴って当該細胞は消失してしまう。我々は、成体において不適切なCLEC-2/Pdpnシグナルの活性化が肺線維化の原因となるmyofibroblastを生みだし、線維化を増悪させるではないかと考えた。そこで、ブレオマイシンによる特発性肺線維症のモデルマウスにおいて抗CLEC-2抗体によって血小板CLEC-2を消失させたところ、体重減少と死亡率の改善およびコラーゲン量の減少が認められた。しかしながら、この実験系に問題があり、それを回避して再度解析したところ肺線維化軽減効果は低下して有意な差が得られなかった。抗CLEC-2抗体は初回投与時に血小板減少を起こしたあと回復する血小板をCLEC-2欠損にすることができ、欠損中に再投与を行うと以降は血小板減少を起こさずにCLEC-2欠損維持期間を延長できる。通常週１回の投与で1か月ほど血小板CLEC-2欠損を維持できるが、特定の条件下（特に炎症が誘導される病態）では抗体の有効期間が短縮し、次回投与前に血小板CLEC-2の発現が回復してしまう。その状態で抗体投与を行うと初回投与時同様血小板減少を起こしてしまうことが判明した。これを考慮すると以前得られた抗CLEC-2抗体による肺線維化軽減効果は、血小板CLEC-2欠損に加えて血小板減少に起因する可能性が示唆された。そこで、計画を前倒して血小板減少モデルマウスのThpo欠損マウス、コラーゲン受容体GPVI欠損マウスの樹立を急ぐこととした。本学支援部署でCRISPR/Cas9で作製を試み、2遺伝子それぞれに複数系統の欠損マウスが得られ、現在実験可能な個体数を確保するべく繁殖を行っている。

我们已经揭示了血小板激活的受体CLEC-2及其配体PDPN之间的相互作用通过分化肺泡肌纤维细胞在血小板激活时导致正常的肺呼吸。我们认为成年人中不适当的CLEC-2/PDPN信号的激活产生了肌细胞，从而引起肺纤维化，并可能加剧纤维化。因此，当抗CLEC-2抗体被抗CLEC-2抗体消除时，在甲霉素模型中，抗体通过抗体，体重减轻，死亡率的提高以及量减少的抗体减少观察到胶原蛋白。但是，该实验系统存在问题，并且在再次分析时，肺纤维化的减少效应降低了，没有显着差异。抗CLEC-2抗体的抗体可能缺乏血小板，该血小板在第一次给药时血小板减少后恢复的血小板，如果在缺陷期间执行重新给药，则CLEC-2在没有的情况下保持血小板减少。通常每周一次，血小板CLEC-2缺陷可以保持大约一个月，但在特定条件下（尤其是炎症诱发的状况），抗体的有效期缩短和下一次给药之前的血小板。 2的表达恢复。事实证明，如果在该状态下施用抗体，则首次会减少血小板细胞。考虑到这一点，建议先前获得的抗CLEC-2抗体肺纤维还原效应可能是由于血小板减少以及血小板CLEC-2的缺陷而引起的。因此，我们决定继续计划，并紧急建立鼠标缺失的鼠标受体GPVI，小鼠。大学支持系尝试使用CRISPR/CAS9制造，并且已经获得了两个基因缺陷中的每一个，并育种以确保当前可以进行实验的个人数量。

项目成果

癌関連線維芽細胞はCLEC-2/PDPNを介して癌関連血栓症を増悪させる

癌症相关成纤维细胞通过 CLEC-2/PDPN 加剧癌症相关血栓形成

• 发表时间: 2022
• 作者: 白井俊光;佐々木知幸;築地長治;大石沙織;横森良平;高野勝弘;井上克枝
• 通讯作者: 井上克枝

Platelets and Ferric Iron

血小板和三价铁

• 发表时间: 2023
• 作者: Tamura Shogo;Mukaide Masato;Katsuragi Yumi;Fujii Wataru;Odaira Koya;Suzuki Nobuaki;Tsukiji Nagaharu;Okamoto Shuichi;Suzuki Atsuo;Kanematsu Takeshi;Katsumi Akira;Takagi Akira;Ikeda Katsuhide;Ueyama Jun;Hirayama Masaaki;Suzuki-Inoue Katsue;Matsushita Tadash;Katsue Suzuki-Inoue
• 通讯作者: Katsue Suzuki-Inoue