免疫抑制蛋白質HLA-G2のバイオ医薬品開発に向けた分子認識基盤解明

阐明免疫抑制蛋白HLA-G2开发生物制药的分子识别基础

基本信息

批准号：
22KJ0088
负责人：
渡邊紘士
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0088/
关键词：
HLA-G2 LILR 免疫抑制

项目摘要

本研究は、免疫抑制蛋白質human leukocyte antigen (HLA)-G2を基盤としたバイオ医薬品開発に向け、ヒト生体内でのHLA-G2作用機序の解明と、特異的抗体を用いた生体内HLA-G2発現量解析系の樹立を目的としている。今年度は、HLA-G2の生体内での作用機序解明に向け、新規受容体の探索を表面プラズモン共鳴(surface plasmon resonance: SPR)法を用いて行った。その結果、HLA-Gの主要なアイソフォームであるHLA-G1の受容体として過去に報告された受容体について、新規HLA-G2受容体であることを示す結果を得た。また、この同定された新規受容体は細胞外ドメインが複数のドメインから構成されることから、いずれの部位がHLA-G2に寄与するかを明らかにするために、この新規HLA-G2受容体をいくつかのドメインに分け、SPR法によってHLA-G2との相互作用を検証することにより、HLA-G2認識に関与するドメインを同定した。しかし、この新規受容体はヒト生体内での機能について知見の乏しい蛋白質であり、詳細な機能は不明であった。一方で、この新規受容体が既知HLA-G2受容体leukocyte immunoglobulin-like receptor (LILR) B2と同様にHLA-G2を認識することが明らかになったため、新規受容体がLILRB2に対し、結合競合性を有するかSPR法を用いて検証した。その結果この新規受容体は既知HLA-G2受容体LILRB2と競合的にHLA-G2に結合することが明らかとなった。また、細胞レベルでの新規受容体によるLILRB2へのアンタゴニスト活性評価を評価するため、LILRB2発現細胞株を用いた細胞アッセイ系を構築した。

这项研究旨在开发基于免疫抑制蛋白人类白细胞抗原（HLA）-G2的生物药物，并使用特定抗体来阐明人类生物体中的作用机理，并建立一个体内HLA-G2表达水平分析系统。今年，为了阐明HLA-G2在体内的作用机理，我们使用表面等离子体共振（SPR）方法搜索了新受体。结果，我们发现先前报道为HLA-G1的受体，HLA-G的主要同工型是新型HLA-G2受体。此外，由于该鉴定出的新型受体的细胞外结构域由多个域组成，以确定哪个位点有助于HLA-G2，因此我们将新型的HLA-G2受体分为几个域，并通过SPR识别涉及HLA-G2识别的域，将其与HLA-G2的相互作用验证。但是，这种新型的受体是一种蛋白质，对其在人体体内功能的知识很少，并且其详细功能尚不清楚。另一方面，据揭示了该新受体以与已知的HLA-G2受体白细胞免疫球蛋白样受体（LILR）B2相同的方式识别HLA-G2，因此，使用SPR方法对新型受体进行了验证，以实现LILRB2的结合竞争力。结果表明，这种新型受体与已知的HLA-G2受体LILRB2以竞争方式与HLA-G2结合。此外，为了评估细胞水平上新型受体对LILRB2对拮抗剂的活性的评估，构建了使用表达LILRB2的细胞系的细胞测定系统。