脂肪細胞由来液性因子による肥満高血圧の分子機序解明及び新規バイオマーカーの開発

阐明脂肪细胞源性体液因子引起肥胖和高血压的分子机制并开发新的生物标志物

基本信息

批准号：
18J11985
负责人：
島田洋樹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18J11985/
关键词：
高血圧肥満副腎肥満高血圧アルドステロン CYP11B2

项目摘要

本研究では副腎アルドステロン合成酵素（CYP11B2）発現誘導能を有する脂肪細胞由来の未知因子を肥満高血圧の責任因子として同定し、その副腎への作用機序を解析することにより肥満高血圧発症の分子機序を解明することを目的としている。脂肪細胞への分化能を有するマウス線維芽細胞由来3T3-L1細胞を脂肪細胞へと分化させ、培養上清を取得した。次に、ヒト副腎腫瘍由来H295R細胞に脂肪細胞より取得した培養上清を添加し、CYP11B2の発現誘導を指標に分子量による分画を行った。その結果、CYP11B2発現誘導を担う特定の画分を見出した。次にCYP11B2発現誘導能を有する画分を質量分析装置により解析し、液性因子の同定を行った。その結果52種の候補因子を同定した。さらに、52種の候補因子の中からシグナルペプチドの有無をSignalP4.1により推定し、シグナルペプチドを有すると考えられた12種を同定することができた。また、CYP11B2の発現誘導を指標にイオン交換クロマトグラフィーを用いた分画を行ったところ、複数のCYP11B2発現誘導活性をもつ画分を取得することができた。この活性画分に含まれると考えられる因子と前述の12種についてHEK293T細胞を用いた分泌蛋白質の大量発現系を構築し、因子を大量に取得した。精製した因子をH295R細胞に順次添加し、CYP11B2の遺伝子発現を確認したところ、数種類の因子にCYP11B2発現誘導活性があることを見出した。

在这项研究中，源自肾上腺肾上腺素合成酶（CYP11B2）表达的未知因子被确定为肥胖的高血压和分析肾上腺机制的负责因素，肥胖高压的分子压力的分子机制阐明。将与脂肪细胞分化的3T3-L1细胞衍生的小鼠成纤维细胞分化为脂肪细胞，并获得培养上清液。接下来，将从脂肪细胞获取的培养上清液从人肾上腺肿瘤中添加到H295R细胞中，并将分裂除以分子量作为CYP11B2表达的指标指标。结果，发现了特定的图片，负责CYP11B2诱导。接下来，通过质谱设备分析了大量的CYP11B2表达诱导，并鉴定出液体因子。结果，确定了52名候选人。此外，在52种候选者中，通过信号4.1估算了信号肽的存在或不存在，并确定了12种被认为具有信号肽的类型。此外，当使用电离色谱法作为CYP11B2诱导的指标进行使用电离色谱法的分裂时，获得了具有多个CYP11B2诱导活性的绘画。对于被认为包括在此活动绘画中的因素，以及上面的12种类型，构建了大量使用HEK293T细胞的分泌蛋白，并获得了许多因素。当将精制因子依次添加到H295R细胞中时，CYP11B2的基因表达被证实，几种类型的因子具有CYP11B2诱导活性。