歯肉上皮下層由来神経幹細胞由来の軸索様神経束の移植による脊髄再生促進

通过移植源自龈下上皮的神经干细胞的轴突样神经束促进脊髓再生

• 批准号: 18K08989
• 负责人: 安部 哲哉
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K08989/
• 关键词: 脊髄損傷; 神経幹細胞; 軸索様神経束; 脊髄再生; 神経束移植療法; 軸索様神経束の作製; 歯肉上皮下層由来神経幹細胞; 脊髄再生治療

1. 歯肉上皮下層由来神経幹細胞より作成した軸索様神経束の特性解明われわれが歯肉上皮下層由来神経幹細胞より作成した軸索様神経束は、表層を走る血管が確認され、免疫染色でも繊維方向に沿って走行する神経線維とともに毛細血管網が神経束内に非常によく形成されている特徴が認められた。脊髄損傷モデル動物へ実際に移植する移植神経束は、作成した軸索様神経束をさらに束ねて太い神経束として作成した。2. 歯肉上皮下層由来神経幹細胞より作成した軸索様神経束の脊髄損傷モデル動物への移植による効果脊髄損傷モデルラットは、移植群、コントロール群ともに免疫抑制剤（シクロスポリンA、デキサメサゾン）を投与して実験を行った。具体的には、移植の24時間前にシクロスポリンAを10mg/kg、デキサメサゾンを0.5mg/kgを投与し、シクロスポリンA は月、水曜に20mg/Kg 、金曜に40mg/Kgを投与し続けた。また最初の週は計3回デキサメサゾン(0.5mg/kg)の投与を併用した。　脊髄損傷モデルラットへの神経束の移植群（ｎ＝5）は、6週で両下肢麻痺の改善（BBBスコアが平均0から6）を認めたことから、本研究の軸索様神経束は、脊髄損傷モデルラットに対する組織移植実験において、生着性能と機能性の獲得を期待し得ることが示唆された。実験群を増やすとともに、軸索様神経束移植により後肢機能回復が得られたラットの一部に対して、移植片部分の再切断を行い、再切断にて回復した機能が失われることを確認した。また、移植後6週の行動学的評価を行った後にラットを安楽死させて灌流固定した後に、脊髄・グラフトを摘出して組織標本を作成し、組織学的・免疫組織学的評価により、移植片の生着性、移植片と脊髄の連続性、軸索再生の評価を行なった。

1. 阐明由源自龈下上皮的神经干细胞产生的轴突样神经束的特征在由源自龈下上皮的神经干细胞产生的轴突样神经束中，确认了在表层中运行的血管，并且免疫染色也显示纤维方向是。观察到神经束内很好地形成了毛细血管网，并且神经纤维沿着神经束走行。实际移植到脊髓损伤模型动物中的移植神经束是通过将制作的轴突状神经束进一步集束成粗神经束而制作的。 2.将来源于龈下上皮层的神经干细胞产生的轴突样神经束移植到脊髓损伤模型动物中的效果在脊髓损伤模型大鼠中，移植组均给予免疫抑制剂（环孢素A、地塞米松）和对照组。具体地，移植前24小时给予环孢素A 10 mg/kg和地塞米松0.5 mg/kg，周一和周三继续给予环孢素A 20 mg/Kg，周五继续给予40 mg/Kg。此外，第一周内总共给予地塞米松（0.5 mg/kg）3次。将神经束移植到脊髓损伤模型大鼠的组（n = 5）在6周内双侧下肢瘫痪（平均BBB评分为0至6）得到改善，因此本研究中的轴突样神经束在脊髓损伤模型大鼠的组织移植实验中，表明有望获得移植性能和功能。除了增加实验组数外，在部分通过轴突样神经束移植恢复后肢功能的大鼠中，移植部分被重新截肢，并证实重新截肢后恢复的功能丧失。 做过。此外，移植后6周进行行为学评估后，将大鼠安乐死并灌注固定，取出脊髓/移植物制备组织标本，组织学和免疫组织学评估显示移植物植入、移植物与脊髓之间的连续性评估脊髓和轴突再生。