腫瘍浸潤Tリンパ球のT細胞受容体のがん特異性の検証と新規がん抗原の同定

验证肿瘤浸润T淋巴细胞的T细胞受体的癌症特异性并鉴定新型癌症抗原

基本信息

批准号：
18K15268
负责人：
下岡清美
金额：
$ 2.66万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K15268/
关键词：
T細胞がん特異的TCR がん治療遺伝子治療 T細胞受容体がん抗原 TCR

项目摘要

申請者らのグループは、極めて短期間に単一T細胞からT細胞受容体（TCR）遺伝子を取得してレパートリー解析および機能評価を可能とする、世界が注目する画期的な方法を確立した。これらの技術をTCR遺伝子治療に臨床応用するには、腫瘍浸潤リンパ球（TIL）中から取得したTCRの癌特異性を検証するシステムが必要不可欠である。本研究では、がん患者のTILから得られたTCR遺伝子を既存のがん細胞株に患者HLAを発現させた細胞株を作製してがん特異性を検証する新しいシステムの確立を試みた。腫瘍細胞のB7発現細胞株の作製と反応増強と脱メチル化処理の効果の検証：モデル抗原としてNY-ESO-1を設定し、脱メチル化処理による発現増強の確認とNY-ESO-1特異的1G4 TCRを発現させたT細胞での反応性の評価を行い、脱メチル化処理の効果を示した。また、がん細胞株にB7分子（CD80）を発現させた場合、IFN-γ産生が4倍ほど増加することがわかった。乳がん細胞株MCF-7を用いて、TIL由来TCRの腫瘍細胞反応性の検証：患者HLAおよびB7分子を発現させたがん細胞株とTIL由来TCRを発現させたT細胞を共培養し、IFN-γの産生を指標に腫瘍反応性を検証した。その結果、現在のところまで、乳がん患者3名から14種類のTCRを解析し、HLA-A*03:01とA*11:01特異的なTCRそれぞれ1種類取得できた。MCF-7のcDNAライブラリーを作製し、COS-7細胞にB7分子およびHLAを発現させた細胞株を作製し、抗原が同定できないか検討している。

申请人的团队建立了一种引起全世界关注的突破性方法，使得能够在极短的时间内从单个T细胞中获得T细胞受体（TCR）基因，从而实现谱分析和功能评估。为了将这些技术应用于TCR基因治疗的临床，验证从肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）获得的TCR的癌症特异性的系统是必要的。在这项研究中，我们试图通过创建一个细胞系来建立一个验证癌症特异性的新系统，其中从癌症患者的 TIL 中获得的 TCR 基因用于在现有的癌细胞系中表达患者的 HLA。表达 B7 的肿瘤细胞系的创建以及反应增强和去甲基化处理的效果的验证：将 NY-ESO-1 设置为模型抗原，通过去甲基化处理确认表达增强以及 NY-ESO-1 特异性我们评估了T 细胞表达目标 1G4 TCR，并证明了去甲基化治疗的效果。此外，当 B7 分子 (CD80) 在癌细胞系中表达时，发现 IFN-γ 的产量增加了大约四倍。使用乳腺癌细胞系 MCF-7 验证 TIL 衍生 TCR 的肿瘤细胞反应性：将表达患者 HLA 和 B7 分子的癌细胞系与表达 TIL 衍生 TCR 的 T 细胞共培养，并使用 IFN -γ 验证肿瘤反应性产量作为指标。因此，迄今为止，我们已经分析了来自三名乳腺癌患者的 14 种 TCR，并能够获得 HLA-A*03:01 和 A*11:01 特异性 TCR 各一种。我们创建了MCF-7的cDNA文库，创建了在COS-7细胞中表达B7分子和HLA的细胞系，并正在研究是否可以识别抗原。