エポキシ化ω3脂肪酸によるマスト細胞活性化制御機構の全貌解明

完整阐明环氧化omega-3脂肪酸对肥大细胞活化的控制机制

• 批准号: 18K14898
• 负责人: 嶋中 雄太
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K14898/
• 关键词: マスト細部; エポキシ化オメガ3脂肪酸; マスト細胞; エポキシ化; オメガ3脂肪酸; アナフィラキシー; アレルギー

近年、先進国におけるアレルギー患者数は急増しており、大きな社会問題となっている。アレルギー患者では血中IgEの上昇とマスト細胞の過度な活性化が生じ ており、マスト細胞の活性化制御機構の解明がアレルギー治療のための急務となっている。申請者はこれまでに、マスト細胞がエポキシ化オメガ3脂肪酸という ユニークな酸化脂肪酸を豊富に産生することにより、マスト細胞自身のIgE/抗原依存的な活性化を促進していることを見出した。しかしながら、(I)エポキシ化オメガ3脂肪酸がどの酵素によって酸化されて産生されるか、さらに(II)エポキシ化オメガ3脂肪酸の標的分子は明らかでなく、本研究課題はこの2点の解明である。2018年度においては（I）を中心に研究を行い、EPAやDHAなどのオメガ３脂肪酸をエポキシ化する酸化酵素としてcyp4a12aおよびcyp4a12bを同定した。2019年度においては(II)を解決すべく、全核内受容体の過剰発現系および、クリックケミストリーを用いた網羅的な探索の両面の解析を進めた。これまでにマスト細胞にエポキシ化オメガ3脂肪酸を添加するとSrcin1という遺伝子の発現が抑制されることを見出している。 これまで脂肪酸は一部の核内受容体の疎水性ポケットに直接結合し、遺伝子発現調整をすると言われるが、核内受容体の脂肪酸に対する活性を網羅的に見た報告はない。そこでマウスの全核内受容体をクローニングし、Srcin1のプロモーター 領域に対するレポーターアッセイを行った。すると核内受容体XにおいてはSrcin1の発現を制御することがわかった。一方で、EPAのアルキン付加体をcyp4a12aを過剰発現させた培養細胞に添加することにより、エポキシ化オメガ３脂肪酸のアルキン付加体を作成できることも確認した。今後クリックケミストリーによりビオチン化し、結合分子を質量分析計により同定する。

近年来，发达国家的过敏患者的数量迅速增加，使其成为一个主要的社会问题。过敏患者的血液IgE和肥大细胞的过度激活增加，迫切需要阐明肥大细胞对过敏治疗的激活控制的机制。申请人先前已经发现，肥大细胞通过产生一种称为环氧化omega-3脂肪酸的丰富，独特的氧化脂肪酸来促进肥大细胞本身的IgE/抗原依赖性激活。但是，尚不清楚哪种酶（i）氧化氧化脂肪酸被氧化以产生哪种酶，并且（ii）尚不清楚环氧化omega-3脂肪酸的靶分子尚不清楚，并且该研究主题是阐明这两点。在2018年，研究主要是在（I）和CYP4A12A和CYP4A12B上进行的，将其确定为氧化酶，将欧米茄-3脂肪酸（如EPA和DHA）化。在2019财年，为了解决（II），我们既进行了整个核受体的过表达系统，又进行了使用点击化学的全面搜索。到目前为止，已经发现，添加环氧化的omega-3脂肪酸以肥大细胞抑制基因SRCIN1的表达。到目前为止，据说脂肪酸直接与某些核受体的疏水袋结合并调节基因表达，但尚无关于核受体对脂肪酸的活性的全面报道。然后将小鼠总核受体克隆，并在SRCIN1的启动子区域进行报告基因测定。这表明核受体X调节了srcin1的表达。另一方面，还可以证实，通过将EPA的炔烃加合到过表达CYP4A12A的培养细胞中，可以生产环氧化omega-3脂肪酸的炔烃加合物。然后通过点击化学进行生物素化，并通过质谱仪鉴定结合分子。

项目成果

Reelin deficiency leads to aberrant lipid composition in mouse brain.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2018.09.089
• 发表时间: 2018-10
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Tomoharu Mizukami;K. Ikeda;Y. Shimanaka;Katsunari Korogi;Chunyu Zhou;H. Takase;H. Tsuiji;N. Kono

ホスホイノシタイド分析を目的とした超臨界流体クロマトグラフ(SFC)の開発

开发用于磷酸肌醇分析的超临界流体色谱仪 (SFC)

• 发表时间: 2018
• 作者: ○嶋中 雄太;河野 望;村上 誠;新井 洋由;○嶋中 雄太
• 通讯作者: ○嶋中 雄太

Development of supercritical fluid chromatography (SFC) method which can separate and quantify phosphoinositides (PIPs)

开发可分离和定量磷酸肌醇（PIP）的超临界流体色谱（SFC）方法

• 发表时间: 2019
• 作者: ◯Yuta Shimanaka;Keiko Matsumot;Yuki Tanaka;Nozomu Kono; Hiroyuki Arai
• 通讯作者: Hiroyuki Arai

Development of supercritical fluid chromatography (SFC) method which can analyse and separate Phosphoinositides (PIPs)

开发可分析和分离磷酸肌醇（PIP）的超临界流体色谱（SFC）方法

• 发表时间: 2018
• 作者: ○Yuta Shimanaka;Keiko Matsumoto;Nozomu Kono;Hiroyuki Arai.
• 通讯作者: Hiroyuki Arai.

細胞内II型PAFアセチルハイドロラーゼによる新規脂肪酸メディエーター産生機構

细胞内II型PAF乙酰水解酶产生新型脂肪酸介质的机制

• 发表时间: 2018
• 作者: ○嶋中 雄太;河野 望;村上 誠;新井 洋由
• 通讯作者: 新井 洋由