Identification of Emphysema Specific Degradation Marker

肺气肿特异性降解标志物的鉴定

基本信息

批准号：
18K07025
负责人：
潮見隆之
金额：
$ 2.91万
依托单位：
International University of Health and Welfare
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

計画１　MMP1による肺気腫特異的細胞外基質分解産物をはじめとした特異的生体分子のスクリーニングと同定モデルマウスを用いた１次スクリーニング、２次スクリーニングとしてBALおよび血清で同定可能な物質を選択（臨床応用を目標としているため、これらのサンプルから検出可能な分子を選択）、さらに３次スクリーニングとしてMMP1阻害剤を用いMMP1発現特異的な肺気腫関連分子の同定のステップを通して候補遺伝子を同定すを行った。この結果として６分子の肺気腫特異的生体分子候補を同定した。計画２　上記６候補分子のin vitro/vivoでの確認と、検出系の確立１）生化学的アッセイ―MMP1と候補タンパク質を用い生化学的にその分解活性を検定する。具体的には、分解活性の時間・量依存性を確認し、分解産物の切断箇所を同定する。３分子が精製した活性型MMP1による、基質として時間及び量依存的分解活性を確認した。また候補分子に関しては、マウスおよびヒト両方のタンパクを用い臨床応用する際に問題が生じないことも確かめた。２）Neo-epidope抗体の確立―上記の実験で同定した候補分子のMMP1による切断部位を中心にneo-epidope抗体樹立のためのペプチドを設計および再設計を行った。尚、また基質活性が無かった残りの３分子についてはpathway analysisによる制御機構に関する仮説モデルを作成した。これによると２分子については、key regulatorとなっている事が示唆され非酵素基質分子ながら肺気腫の病態形成に関わる特異的分子である可能性が高い。

计划1：筛选特定的生物分子，包括使用MMP1的特异性生物分子降解产物，并使用小鼠鉴定基本筛查，选择可以在BAL和血清中鉴定为次级筛查的物质（因为可以从这些临床筛选中鉴定靶标的临床筛查，然后使用这些群体，然后使用这些样品，并且在这些群体中进行了筛选，并在这些群体中进行了MMP1，并且是MMP1的），并且是MMP1的临床筛选，并且基因通过鉴定与MMP1表达特异性的肺气肿相关分子的步骤。结果，确定了六个肺气肿特异性生物分子。计划2：在体外/体内确认以上六个候选分子并建立检测系统1）使用MMP1和候选蛋白质的生化测定 - 生化测定法，以评估其生化降解活性。具体而言，确认了时间和量依赖性降解活性，并确定了降解产物的切割位置。活性MMP1纯化的三个分子的时间和量依赖性降解活性被证实为底物。也证实，在临床应用中同时使用小鼠和人类蛋白质时，不会出现问题。 2）设计和重新设计了用于建立新epidope抗体的肽的建立 - 重点是在上述实验中通过MMP1鉴定的候选分子的裂解位点。此外，对于没有底物活性的其余三个分子，创建了通过途径分析的调节机制的假设模型。这表明这两个分子是关键调节剂，尽管它们是非酶底物分子，但它们可能是参与肺气肿发病机理的特定分子。