Investigation of mechanisms of neuropathic pain using compartment culture

使用隔室培养研究神经性疼痛的机制

基本信息

批准号：
19K09379
负责人：
柴崎雅志
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Campenot chamberを用いたin vitro神経障害性疼痛モデルにより、２つの軸索コンパートメントのうち、一方の軸索コンパートメントの軸索を傷害させることにより、他方の軸索コンパートメントにおいて発現量の変化するタンパク質を検出することが研究の目的であった。しかしながら、これまでの調査によりSDS-PAGEを行っても特異的なバンドは認められなかった。SDS-PAGEによる特異的なバンドが検出できれば、脊髄を用いた免疫組織染色および脾臓由来単球系細胞を用いた化学遊走能を調査することにより神経障害性疼痛に関与するタンパク質を同定する予定であった。そこで文献的調査により標的タンパク質を予め決め、脾臓細胞から磁気細胞選別により抽出したCD11b陽性細胞を用いた化学遊走能を調査することで神経障害性疼痛に関与する可能性のある標的タンパク質を絞る研究を実施することにした。1. 脾臓由来細胞のうち、CD11b陽性細胞がどの程度存在するかを脾臓由来細胞を培養し、免疫細胞染色により調査する。2. 次に脾臓由来細胞を磁気細胞選別によりCD11b陽性細胞のみを抽出する。3. 抽出したCD11b陽性細胞を用い、予め文献的に調査した標的タンパク質を用いた化学遊走能を評価する。4. 化学遊走能の評価に基づき、神経障害性疼痛に関与する可能性のあるタンパク質をマウスに投与し、疼痛閾値の評価を行う。5. 神経障害性疼痛に関与する可能性のあるタンパク質を薬理学的に中和することによる疼痛閾値の評価を行う。

通过使用 Campenot 室的体外神经病理性疼痛模型，通过损伤两个轴突室之一中的轴突，检测到另一个轴突室中表达水平发生变化的蛋白质。然而，根据之前的调查，即使进行SDS-PAGE也没有观察到特异性条带。如果可以通过 SDS-PAGE 检测到特定条带，我们计划通过使用脊髓进行免疫组织化学染色来鉴定与神经性疼痛有关的蛋白质，并使用脾源性单核细胞研究趋化活性。因此，我们通过文献回顾提前确定了目标蛋白，并利用磁性细胞分选从脾细胞中提取的CD11b阳性细胞研究了它们的趋化能力，从而缩小了可能与神经性疼痛有关的目标蛋白的范围，我们决定实施。这。 1. 培养脾源细胞，通过免疫细胞染色研究脾源细胞中CD11b阳性细胞的存在程度。 2. 接下来，通过磁性细胞分选从脾源细胞中仅提取 CD11b 阳性细胞。 3. 使用提取的 CD11b 阳性细胞，使用文献中先前研究的靶蛋白评估其趋化能力。 4.在趋化能力评估的基础上，给小鼠注射可能与神经病理性疼痛有关的蛋白质，并评估疼痛阈值。 5. 通过药理学中和可能与神经性疼痛有关的蛋白质来评估疼痛阈值。