Targeting therapy of oral cancer stem cell renewal by RNA editing enzyme

RNA编辑酶靶向治疗口腔癌干细胞更新

基本信息

批准号：
19K10342
负责人：
奥村一彦
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Health Sciences University of Hokkaido
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ADAR1はRNA編集におけるアデノシンをイノシンに変換する酵素で、転写後の修飾によって直接編集することが知られている。ADAR1発現の亢進によって造腫瘍や放射線耐性、化学療法耐性を獲得し、さらには幹細胞化を獲得することが報告されている。そこで、ヒト舌扁平上皮癌細胞株を用いて、低接着性培養プレートで非血清培養し細胞集塊(スフェロイド)を形成させることに成功した。このような癌細胞集塊は、癌幹細胞様の細胞が多く含まれることが示唆されている。本研究は、この癌細胞スフェロイドを構成する細胞と、スフェロイド形成前の細胞を比較して、以下の実験を行った。1. 癌細胞スフェロイドを構成する細胞におけるADAR1の発現異常の解析: スフェロイド形成前の細胞と癌細胞スフェロイドを構成する細胞のADAR1発現を定量的RT-PCRを用いて測定したところ、癌細胞スフェロイドを構成する細胞でADAR1が高発現していた。2. 癌細胞スフェロイドを構成する細胞におけるADARの役割:ADAR阻害薬であるEHNA塩酸塩とpentostatinの処理を行った癌幹細胞で、増殖活性、細胞遊走能、基底膜浸潤能、基質分解酵素産生能を検討した。その結果、ADAR阻害薬によって、細胞増殖抑制を認め、細胞遊走と基底膜浸潤能が低下していた。また、基質分解酵素産生能を検討した結果、癌細胞スフェロイドを構成する細胞の未処理群と比較し基質分解酵素産生が減少していた。3. 癌細胞スフェロイドを構成する細胞における自己複製能の制御:癌幹細胞におけるADAR1のノック・ダウンによる形質変化の解析を行った。 ADAR1遺伝子に特異性を持つsiRNAを数種合成したものを電気穿孔法で細胞導入した。その結果、癌幹細胞が発現するSOX2とPOU5F1の発現を検討した結果、si-ADAR1導入細胞ではSOX2とPOU5F1の発現低下がみられた。

ADAR1是一种将腺苷转换为RNA编辑中插入的酶，已知通过转录后修饰直接编辑。据报道，增加的ADAR1表达会导致肿瘤建设，耐药性，化学疗法耐药性甚至干细胞形成的获取。因此，人舌鳞状细胞癌细胞系被用于在低粘附培养板上成功培养非秘密，以形成细胞簇（球形）。已经提出，这种癌细胞簇包含大量癌症干细胞样细胞。这项研究通过比较构成该癌细胞球体的细胞与球体形成之前的细胞进行了以下实验。 1。在组成癌细胞球体的细胞中ADAR1异常表达的分析：当使用定量RT-PCR测量球体形成前的ADAR1表达和组成癌细胞球体的细胞时，ADAR1表达在构成构成细胞球体的细胞的细胞中高度表达。 2。ADAR在组成癌细胞球体的细胞中的作用：我们研究了通过ADAR抑制剂EHNA抑制剂EHNA氢氯化物和五胞菌素治疗的癌症干细胞中的增殖活性，细胞迁移能力，地下膜侵袭能力以及底物降解酶产生能力。结果，ADAR抑制剂显示出细胞增殖的抑制作用，细胞迁移和基底膜侵袭能力降低。此外，由于研究了产生底物降解酶的能力，与构成癌细胞球体的未经处理的细胞相比，底物降解酶的产生降低了。 3。控制组成癌细胞球体的细胞中的自我更新能力：我们分析了癌症干细胞中ADAR1敲低引起的性状变化。合成了几种对ADAR1基因的特异性的siRNA，并通过电穿孔引入细胞。结果，我们研究了由癌症干细胞表达的SOX2和POU5F1的表达，并发现Si-Adar1转导的细胞显示SOX2和POU5F1的表达降低。