肺線維化環境での免疫担当細胞のクロストークおよび加齢影響と治療応用についての研究

肺纤维化环境中免疫活性细胞的串扰、衰老的影响以及治疗应用的研究

基本信息

批准号：
19K08614
负责人：
神尾孝一郎
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Nippon Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

一昨年度までに、骨髄細胞の抗線維化作用が確認されており、骨髄細胞をIL-4あるいはIL-4＋TGF-beta1で培養し、ブレオマイシン誘発肺線維症モデルマウスに投与すると肺線維化が有意に抑制されることが確認された。本細胞のphenotypeをRT-PCRを用いて検討したところ、この細胞はF4/80をマクロファージと同程度に発現していることが確認された。さらにこれらの細胞では、CD86は低下していたが、CD206、Ym-1、Arginase-IといったM2マクロファージのマーカーが増加しており、IL-4ならびにIL-4+TGF-beta 1で分化させた細胞は、M2-like マクロファージである事が示唆された。これらの細胞を養子移入した後の細胞の分布を調べるために、GFPトランスジェニックマウスの骨髄細胞をIL-4などで分化させ養子移入し、肺内での分布を確認することを試みたが、養子移入後１４日目にsacrificeした肺内では（ブレオマイシン投与後からは２８日目）、GFP陽性細胞は確認することができなかった。またこれらの細胞から分泌される可能性のあるMMP-9を免疫染色などで確認を試みたが、MMP-9陽性細胞の存在は確認できなかった。われわれの教室では、これまで制御性T細胞（regulatory T cells; Tregs）による抗線維化作用を報告しているが、腎臓の線維化病態では、M2マクロファージによるTregの誘導を介した病態の改善効果が報告されている。このため骨髄細胞をIL-4と共培養しM2-likeマクロファージを作成し、脾臓より抽出したCD4陽性リンパ球と共培養した。しかしながら期待されるようなTregsへの分化誘導は認められなかった。

两年前，骨髓细胞的抗纤维化作用得到证实，用IL-4或IL-4+TGF-β1培养骨髓细胞，给予博莱霉素诱导的肺纤维化模型小鼠，肺纤维化明显减轻。已证实其被抑制。当使用RT-PCR检查该细胞的表型时，证实该细胞以与巨噬细胞相同的程度表达F4/80。此外，这些细胞中的 CD86 减少，但 M2 巨噬细胞标记物如 CD206、Ym-1 和精氨酸酶-I 增加，并且这些细胞用 IL-4 和 IL-4 + TGF-β 1 进行分化。建议为M2样巨噬细胞。为了检查这些细胞在过继移植后的分布，我们尝试用IL-4区分来自过继移植的GFP转基因小鼠的骨髓细胞，并确认在肺内没有发现GFP阳性细胞的分布。过继转移后第14天（给予博来霉素后第28天）处死肺。我们还尝试通过免疫染色确认这些细胞可能分泌的MMP-9，但我们无法确认MMP-9阳性细胞的存在。在我们的实验室中，我们之前报道过调节性T细胞（Tregs）的抗纤维化作用，但在肾脏纤维化中，我们认为M2巨噬细胞可以通过诱导Tregs来改善病理状况。为此，将骨髓细胞与 IL-4 共培养以产生 M2 样巨噬细胞，然后将其与从脾中提取的 CD4 阳性淋巴细胞共培养。然而，没有观察到预期的分化为 Tregs 的诱导。