RNA結合タンパク質RBM10欠損による無精子症の発症機序解明と治療法の探索

RNA结合蛋白RBM10缺乏引起的无精子症的发病机制和治疗的阐明

基本信息

批准号：
19K08327
负责人：
國本浩之
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka Metropolitan University (2022)Osaka City University (2019-2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K08327/
关键词：
精子形成不全選択的スプライシング精子形成

项目摘要

マウスの発生・成長段階の種々の時期にRBM10欠損が可能となるよう、RBM10遺伝子をCreリコンビナーゼ標的配列loxP配列で挟んだRBM10 floxedマウスを作製した。このRBM10 floxedマウスとタモキシフェン投与によりCreリコンビナーゼを全身で活性化できるデリーターマウスを交配し、産仔を得た。発生段階でのRBM10欠損は胎生致死となることから、ヒトの小児に該当するマウスの発生後から性成熟前の種々の時期にRBM10欠損を誘導し、観察を行った。その結果、離乳期（3週齢）の雄マウスに100mgタモキシフェン/kgを連続５日間投与し、性成熟期（8週齢）で精巣の重量と体重を測定したところ、タモキシフェン投与で全身でのRBM10欠損を誘導した雄マウスではコントロール群に比し、精巣重量の低下が認められた。このとき、腎臓など他の臓器ではほとんど変化が認められなかった。そこで、全身でのRBM10欠損誘導雄マウスの精巣組織切片の解析を行った。その結果、精巣内にはセルトリ細胞、ライディッヒ細胞および精原細胞が認められるにもかかわらず、精子分化が途中で停止していることが明らかとなった。また、3週齢で全身でのRBM10欠損を誘導した雄マウスを長期飼育(88-91週齢）後に解剖し各組織の異常を調べたが、精巣重量の低下以外、大きな変化は認められなかった。次に、８週齢のコントロールマウスと全身でRBM10欠損を誘導した雄マウスの精巣からRNAを回収しRNA-Seq解析から両者で発現量に差がある遺伝子を求めた。その結果、ある一群の遺伝子に変動があることを見出した。現在、見出した遺伝子群の発現変動をqPCRで確認中である。

为了使RBM10缺乏在小鼠发育和生长的各个阶段，RBM10 Floxed小鼠用夹在CRE重组酶靶序列LOXP序列之间的RBM10基因制备。该RBM10 floxed小鼠用拆卸小鼠繁殖，该小鼠可以通过他莫昔芬系统系统地激活CRE重组酶，并获得了婴儿。由于在发育阶段的RBM10缺乏对胚胎寿命是致命的，因此在与人类儿童相对应之前的小鼠发育后的不同时间诱发了RBM10缺乏症，直到性成熟之前，并进行了观察。结果，在断奶时（3周大）对雄性小鼠服用100毫克的他莫昔芬/kg连续5天，在性成熟时测量了体重和体重（8周龄），雄性小鼠在他莫昔富施用后全身诱导了与对照组相比降低了整个身体的RBM10缺乏症。目前，肾脏等其他器官几乎没有变化。因此，我们分析了全身引起的RBM10缺乏症的雄性小鼠的睾丸组织切片。结果，尽管在睾丸中发现了Sertoli细胞，Leidig细胞和精子细胞，但仍显示了精子分化的一半。此外，在长期护理（88-91周龄）后剖定了在3周龄诱导整个体内RBM10缺乏症的雄性小鼠检查每个组织中的异常，但是观察到没有显着变化，除了睾丸体重减少。接下来，从8周大的对照小鼠和雄性小鼠的睾丸中收集RNA，这些小鼠诱导了整个体内RBM10缺乏，并通过RNA-Seq分析确定具有不同表达水平的基因。结果，我们发现一组基因存在变化。当前，QPCR用于确认发现基因组的表达变异。