Direct activation of antimalarial immunity by artificial exposure of phosphatidylserine on malaria parasite-infected red blood cells

通过人工暴露疟原虫感染的红细胞上的磷脂酰丝氨酸直接激活抗疟免疫

• 批准号: 19K07521
• 负责人: 東岸 任弘
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K07521/
• 关键词: マラリア; 感染赤血球; ホスファチジルセリン; エリプトーシス; 免疫誘導型マラリア薬; 免疫誘導型抗マラリア薬

前年度までに感染赤血球特異的にホスファチジルセリンを露出させる低分子化合物のスクリーニングを可能な系を構築した。しかし、病原体であるマラリア原虫を用いたスクリーニングでは１度に準備できる量に限界があるなど、効率的なスクリーニングができなかった。そこで浮遊系のヒト培養細胞を用いたスクリーニング系も併せて構築したところ、複数のポジティブな低分子化合物が取得できた。しかしパイロット試験で取得した低分子化合物はマラリア原虫を用いた本試験においてほとんど効果がみられず、マラリア原虫を用いたスクリーニング法の改善が結局は近道であった。そこで前々年度、前年度に引き続き今年度もさらにマラリア原虫を用いたスクリーニング法を改善しつつスクリーニングを再開した。しかし、目的とする化合物が得られず、より効果的、効率的なスクリーニング法を確立する必要があり、改良を重ねた。具体的には、マラリア原虫感染赤血球の調整法の検討、化合物の添加量・添加のタイミングの検討、感染赤血球の固定法の検討、露出したホスファチジルセリンの検出法の検討である。今年度はこれらの方法を検討しつつ化合物のスクリーニングを進めたが、満足のいく化合物は得られなかった。これまでに既に取得している低分子化合物に関して、前年度に当該低分子化合物と結合するマラリア原虫タンパク質のスクリーニングを実施し、候補タンパク質を複数同定した。そこで当該低分子化合物とこれらのタンパク質との相互作用の確認を目的として、組換えタンパク質の合成、さらに検出抗体（抗血清）を作成した。作成した検出抗体を用いて作用機序の解明を進めた。

到上一年，构建了一个系统，该系统允许筛选小分子化合物，该化合物专门暴露了磷脂酰丝氨酸感染红细胞。但是，使用病原体疟疾寄生虫进行筛查无法有效筛查，因为一次可以准备的量限制。因此，还构建了使用浮动人培养细胞的筛选系统，并获得了多种阳性小分子化合物。但是，在试验测试中获得的小分子化合物在使用血浆疟疾寄生虫的实际测试中几乎没有影响，并且使用血浆疟疾寄生虫改善筛选方法是最短的方法。因此，与上一年一样，我们今年恢复了筛查，继续使用疟原虫寄生虫改善筛查方法。但是，没有获得靶化合物，有必要建立一种更有效，更有效的筛选方法，并重复进行改进。具体而言，这项研究将针对控制感染疟原虫的红细胞的方法，检查化合物的添加的数量和时间，检查感染的红细胞的固定，并检查暴露磷脂酰甲酯的检测。今年，我们在检查这些方法时继续筛选化合物，但没有获得令人满意的化合物。关于前一年先前获得的小分子化合物，对与小分子化合物结合的疟原虫蛋白进行了筛查，并鉴定了多种候选蛋白。因此，为了确认小分子化合物与这些蛋白质之间的相互作用，准备了重组蛋白合成和检测抗体（抗毛体）。使用准备好的检测抗体阐明了作用机理。

项目成果

University of California, San Diego(米国)

加州大学圣地亚哥分校（美国）