メタゲノム解析による食品衛生指標菌の選抜と汚染源推定技術への応用

宏基因组分析筛选食品卫生指示菌及其在污染源估算技术中的应用

• 批准号: 19K05939
• 负责人: 富永 達矢
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Japan Women's University (2022)Saitama Industrial Technology Center (2019-2021)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K05939/
• 关键词: 食品衛生; 腐敗指標; メタゲノム解析; 細菌フローラ; 腐敗食品; 次世代シーケンサー; 指標菌; 抗体; イムノクロマト

本研究では、腐敗食品の指標となる細菌種の選抜とその簡易検出システムの構築を目的としている。昨年度までの研究で、腐敗した食肉や洋菓子の指標菌を選抜した。そして、イムノクロマトアッセイによって洋菓子の腐敗度を評価できることが分かった。本年度は、細菌全般を検出するため、ポリリジンを用いた試験紙を構築し、それを用いたアッセイ(polylysine-based lateral flow assay: PLFA)の検出感度やスペクトルを調べた。腐敗した食品から検出される事例が多い腸内細菌科属の細菌、乳酸菌、Pseudomonas属の細菌、 Bacillus属の細菌等34属88種90株すべてをPLFAによって検出できた。≧6 log10 (cfu/test)の菌濃度のときに陽性となった。合計36種類の新鮮な食品(レタス、千切りキャベツ、細切りダイコン、もやし、食肉、洋菓子)とそれに相当する36種類の腐敗した食品を3h、6h、9h培養し、各々何時間培養したときにPLFAで検出できるか調べた。すべてのサンプルにおいて、腐敗食品は新鮮食品よりも短い培養時間でPLFA陽性となった。そして、①0hで陽性の場合：>8.1 log10(cfu/g)、②3hで陽性の場合：>6.8 log10(cfu/g)、③6hで陽性の場合：>5.1 log10(cfu/g)、④9hで陽性の場合：>4.4 log10(cfu/g)、⑤9hでも陰性の場合：<4.4log10(cfu/g)と推測した場合、正答率96%(69/72)の確率で培養前の食品の細菌汚染の程度を予測できることが分かった。PLFA陽性となるまでの時間とlog10食品のinitial菌数(cfu/g)の関連を調べたところ、回帰直線の信頼係数は0.9888を示した。前処理をふくめたPLFAの試験時間は約30分であった。

这项研究旨在选择用作变质食物的指标的细菌物种，并为其建立一个简单的检测系统。在研究到去年之前，我们选择了用于腐烂肉类和西方糖果的指标细菌。然后发现，可以通过免疫色谱法测定法评估西方糖果的变质程度。今年，为了检测所有细菌，我们使用聚赖氨酸构建了一份测试纸，并检查了基于聚赖氨酸的横向流动测定法（PLFA）的检测灵敏度和光谱。 PLFA检测到所有90个菌株的34个属，88种，包括肠杆菌科家族的细菌，乳酸菌细菌，假单胞菌属的细菌和来自芽孢杆菌属的细菌。当细菌浓度为≧6log10（CFU/测试）时，该测试为阳性。共有36种新鲜食品（生菜，卷心菜，萝卜切碎，豆芽，肉类和西方糖果）以及相应的36种类型的宠物培养3、6和9小时，并检查了在培养3个小时时是否可以被PLFA检测到它们是否可以检测到它们。在所有样品中，被宠坏的食物呈PLFA呈阳性，孵化时间较短，而新鲜食品则是较短的孵化时间。而且，当我们估算为0H时的正阳性时：> 8.1 log10（cfu/g）时，②在3H：> 6.8 log10（cfu/g）时为阳性，③在6H：> 5.1 log10（cfu/g）时为正阳性，④阳性在9H：> 4.4 log10（cfu/g），cfu/g），g.4.4 log at n we 4.4，可以预测培养前食物细菌污染的概率（69/72）的概率可以预测。当我们研究时间之间的关系与PLFA阳性和Log10食品的初始细菌计数（CFU/G）时，回归线的置信系数为0.9888。 PLFA的测试时间（包括预处理）约为30分钟。

项目成果

Rapid quantification of coliforms in ready‐to‐eat foods using lateral‐flow immunochromatographic assay

• DOI: 10.1111/jfs.12835
• 发表时间: 2020-10
• 期刊: Journal of Food Safety
• 影响因子: 2.4
• 作者: T. Tominaga

Detection of microorganisms with lateral flow test strips

• DOI: 10.1016/bs.mim.2019.11.007
• 发表时间: 2020-01-01
• 期刊: IMMUNOLOGICAL METHODS IN MICROBIOLOGY
• 作者: Tominaga, Tatsuya;Ishii, Masaharu
• 通讯作者: Ishii, Masaharu

イムノクロマト試験紙によるサワードウモニタリング技術の開発

免疫层析试纸监测酸面团技术的开发

• 发表时间: 2021
• 作者: 富永達矢;石井正治
• 通讯作者: 石井正治