Identification and evaluation of novel vaccine candidates to control poultry red mites (Dermanyssus gallinae)

控制家禽红螨（鸡皮螨）的新型候选疫苗的鉴定和评价

• 批准号: 20J22235
• 负责人: 藤澤 宗太郎
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-24 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J22235/
• 关键词: ワクモ; ワクチン

本年度は当初の予定通り下記 (1) の研究を主に行い、加えて (2) の研究にも着手した。(1) 申請者らは過去に実施したワクモのトランスクリプトーム解析により3種類のワクチン抗原候補(cystatin様分子、Dg-Cys; 銅イオントランスポーター様分子、Dg-Ctr1; adipocyte plasma membrane-associated protein様分子、Dg-APMAP)を同定した。本年度は令和2年度に抗ワクモ効果を示したDg-Cys及びDg-Ctr1について、その成果を基に、抗ワクモワクチンの成分として特許申請を行った (特願2021-080691)。また、Dg-APMAPの免疫血漿についても同様に抗ワクモ効果を検討した結果、発育ステージを問わず殺ダニ効果を認めた。さらに、Dg-Cysの免疫血漿をDg-Ctr1またはDg-APMAPの免疫血漿と組み合わせた混合血漿を用いて抗ワクモ効果を検討したところ、成ダニに対しても殺ダニ効果を示し、また各血漿を単独で用いた場合と比べ殺ダニ効果が増強することを示した。(2) 組換えマレック病ウイルスを用いたウイルスベクターワクチンの検討を行った。病原性遺伝子を欠損させたマレック病ウイルスゲノムにDg-CysまたはDg-APMAP遺伝子を挿入した感染性クローンプラスミドを作製し、ニワトリ線維芽細胞に導入することで組換えウイルスを得た。感染細胞よりmRNAを抽出し、RT-PCRによってDg-Cys及びDg-APMAP遺伝子の発現を確認した。今後は感染細胞における標的タンパク質の発現を確認した後、組換えウイルスをニワトリに免疫し、抗体産生の誘導能の検討が必要である。

今年，按照原计划，我们主要进行以下（1）方面的研究，此外，我们还开始了（2）方面的研究。 (1) 申请人通过对红螨进行的转录组分析，鉴定出三类候选疫苗抗原（半胱氨酸蛋白酶抑制剂样分子，Dg-Cys；铜离子转运蛋白样分子，Dg-Ctr1；脂肪细胞质膜相关蛋白）过去发现了类似的分子，Dg-APMAP）。今年，基于2020年显示出抗红螨效果的Dg-Cys和Dg-Ctr1的结果，我们申请了作为抗红螨疫苗成分的专利（专利申请2021-080691）。此外，当以相同的方式检查Dg-APMAP免疫血浆的抗红螨效果时，发现无论发育阶段如何，它都具有杀螨效果。此外，当我们使用Dg-Cys免疫血浆与Dg-Ctr1或Dg-APMAP免疫血浆组合的混合血浆检查抗红螨效果时，我们发现它对成年蜱也具有杀螨作用。与单独使用相比，杀螨效果增强。 (2)我们研究了使用重组马立克氏病病毒的病毒载体疫苗。通过构建在删除了致病性基因的马立克氏病病毒基因组中插入Dg-Cys或Dg-APMAP基因的感染性克隆质粒，并将其导入鸡成纤维细胞中，获得重组病毒。从感染细胞中提取mRNA，并通过RT-PCR证实Dg-Cys和Dg-APMAP基因的表达。未来，在确认感染细胞中目标蛋白的表达后，需要用重组病毒对鸡进行免疫，并检测其诱导抗体产生的能力。

项目成果

Characterization of a novel cysteine protease inhibitor from poultry red mites: potential vaccine for chickens

家禽红螨的新型半胱氨酸蛋白酶抑制剂的表征：潜在的鸡疫苗

• DOI: 10.3390/vaccines9121472
• 发表时间: 2021
• 作者: Fujisawa S; Murata S; Isezaki M; Ariizumi T; Sato T; Oishi E; Taneno A; Maekawa N; Okagawa T; Ichii O; Konnai S; Ohashi K.
• 通讯作者: Ohashi K.

抗ワクモワクチン組成物及びその使用

抗红螨疫苗组合物及其用途

• 发表时间: 2021

Transcriptome dynamics of blood-fed and starved poultry red mites, Dermanyssus gallinae

血饲和饥饿家禽红螨（鸡皮螨）的转录组动态

• DOI: 10.1016/j.parint.2020.102156
• 发表时间: 2020
• 影响因子: 1.9
• 作者: Fujisawa; S.; Murata; S.; Isezaki; M.; Oishi; E.; Taneno; A.; Maekawa; N.; Okagawa; T.; Konnai; S.; Ohashi; K.
• 通讯作者: K.

Characterization of a copper transporter 1 from Dermanyssus gallinae as a vaccine antigen

鸡皮螨铜转运蛋白 1 作为疫苗抗原的表征

• DOI: 10.1017/s0031182021001608
• 发表时间: 2021
• 影响因子: 2.4
• 作者: Fujisawa Sotaro;Murata Shiro;Isezaki Masayoshi;Ariizumi Takuma;Sato Takumi;Oishi Eiji;Taneno Akira;Maekawa Naoya;Okagawa Tomohiro;Ichii Osamu;Konnai Satoru;Ohashi Kazuhiko
• 通讯作者: Ohashi Kazuhiko

Transcriptome dynamics of blood-fed and starved poultry red mites, Dermanyssus gallinae

血饲和饥饿家禽红螨（鸡皮螨）的转录组动态

• DOI: 10.1016/j.parint.2020.102156
• 发表时间: 2020
• 影响因子: 1.9
• 作者: Fujisawa; S.; Murata; S.; Isezaki; M.; Oishi; E.; Taneno; A.; Maekawa; N.; Okagawa; T.; Konnai; S.; Ohashi; K.
• 通讯作者: K.