犬固形腫瘍に対する低コストかつレディメイドで適応可能なCAR-T細胞製剤の開発

开发用于犬实体瘤的低成本、现成的 CAR-T 细胞制剂

• 批准号: 20H03141
• 负责人: 加藤 大貴
• 金额: $ 11.23万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03141/
• 关键词: 犬; 腫瘍; 免疫療法; CAR-T細胞療法; 獣医腫瘍免疫学; CAR-T細胞; 固形腫瘍; 腫瘍抗原; HER2; GPC1; PDPN; 腫瘍免疫療法; ポドプラニン; 細胞療法; 腫瘍免疫

本研究では、申請者が同定してきた犬固形腫瘍に特異的に過剰発現する標的抗原であるHER2およびGPC1、PDPNを標的としたキメラ抗原受容体CAR-T細胞製剤を、犬T細胞株を用いて作製し、その製材化を目指している。本年度は作成したCARベクターの機能を検証するために、健常犬ドナーより採取した末梢血単核球から活性化犬T細胞を作成し、作成したCARベクターの遺伝子導入を試みた。末梢血単核球から活性化犬T細胞を作成するにあたって、複数の刺激試薬および培養液、添加サイトカインとその濃度など培養条件を検討し、活性化犬T細胞作成の最適な培養条件を同定した。作成した活性化犬T細胞は2ヶ月以上の長期に渡って、継代培養が可能であることがわかり、長期にわたる様々な検証に利用可能なT細胞の培養条件が確立できた。つぎに、活性化犬T細胞に遺伝子導入試薬およびRetroNectin法にて、遺伝子導入を試みたが、標準的なエンベロープでは犬T細胞への遺伝子導入が困難であったため、複数のエンベロープplasmidを入手し、比較検討を行った。その結果、効率的に犬T細胞への遺伝子導入が可能なエンベロープplasmidを同定でき、犬CAR-T細胞を作成できた。作成した犬T細胞と標的抗原を発現する犬腫瘍細胞株の共培養を行ったところ、抗原特異的なサイトカイン産生能の確認ができた。今後、抗原特異的な増殖能や細胞傷害活性などを確認するとともに、犬T細胞株への遺伝子導入を進めていく予定である。

在这项研究中，我们将使用犬T细胞系开发针对HER2、GPC1和PDPN的嵌合抗原受体CAR-T细胞制剂，这些抗原是申请人已确定的在犬实体瘤中特异性过度表达的靶抗原。使用木材制造材料并将其转化为木材。今年，为了验证所创建的CAR载体的功能，我们利用从健康狗捐献者收集的外周血单核细胞创建了活化的犬T细胞，并尝试将所创建的CAR载体进行基因转移。当从外周血单核细胞产生活化的犬T细胞时，我们研究了多种刺激试剂和培养基等培养条件，添加了细胞因子及其浓度，并确定了产生活化的犬T细胞的最佳培养条件。结果发现，生成的活化犬T细胞可以进行2个月以上的长期传代培养，并建立了可用于各种长期验证的T细胞培养条件。接下来，我们尝试使用基因转移试剂和RetroNectin方法将基因导入犬T细胞中，但使用标准包膜很难将基因导入犬T细胞中，因此我们获得了多个包膜质粒，进行了比较研究。 。结果，我们能够鉴定出一种包膜质粒，可以有效地将基因转移到犬T细胞中，并能够产生犬CAR-T细胞。当产生的犬T细胞与表达靶抗原的犬肿瘤细胞系共培养时，证实了产生抗原特异性细胞因子的能力。未来，我们计划确认抗原特异性增殖能力和细胞毒活性，并将基因转移到犬T细胞系中。

项目成果

Expression of podoplanin in various types of feline tumor tissues

平足蛋白在猫各类肿瘤组织中的表达

• DOI: 10.1292/jvms.20-0608
• 发表时间: 2021
• 影响因子: 1.2
• 作者: KAMOTO Satoshi;SHINADA Masahiro;KATO Daiki;TSUBOI Masaya;YOSHIMOTO Sho;YOSHITAKE Ryohei;ETO Shotaro;IKEDA Namiko;TAKAHASHI Yosuke;HASHIMOTO Yuko;CHAMBERS James;UCHIDA Kazuyuki;YAMADA Shinji;KANEKO Mika K.;NISHIMURA Ryohei;KATO Yukinari;NAKAGAWA Takayuki
• 通讯作者: NAKAGAWA Takayuki

MM/GB(PB)SA integrated with molecular docking and ADMET approach to inhibit the fat-mass-and-obesity-associated protein using bioactive compounds derived from food plants used in Traditional Chinese Medicine

MM/GB(PB)SA 结合分子对接和 ADMET 方法，利用中药食用植物中提取的生物活性化合物抑制脂肪量和肥胖相关蛋白

• DOI: 10.1016/j.prmcm.2024.100435
• 发表时间: 2024-05-01
• 期刊: Pharmacological Research - Modern Chinese Medicine
• 作者: M. M;al;al;Shyamapada M;al;al
• 通讯作者: al

獣医複合免疫療法の未来(JONCOL; Japanese Journal of Clinical Oncology)

兽医联合免疫疗法的未来（JONCOL；日本临床肿瘤学杂志）

• 发表时间: 2022
• 作者: 加藤大貴; 池田凡子; 西村亮平; 中川貴之
• 通讯作者: 中川貴之

Podoplanin promotes the tumor growth of canine malignant melanoma via Rho-associated kinase signals

Podoplanin 通过 Rho 相关激酶信号促进犬恶性黑色素瘤的肿瘤生长

• 发表时间: 2021
• 作者: Masahiro Shinada; Daiki Kato; Namiko Ikeda; Toshio Li; Yuka Kodera; Masaya Tsuboi; James Chambers; Kazuyuki Uchida; Yukinari Kato; Ryohei Nishimura; Takayuki Nakagawa.
• 通讯作者: Takayuki Nakagawa.

PDPN Is Expressed in Various Types of Canine Tumors and Its Silencing Induces Apoptosis and Cell Cycle Arrest in Canine Malignant Melanoma

PDPN 在多种类型的犬肿瘤中表达，其沉默可诱导犬恶性黑色素瘤的细胞凋亡和细胞周期停滞

• DOI: 10.3390/cells9051136
• 发表时间: 2020
• 影响因子: 6
• 作者: Shinada Masahiro;Kato Daiki;Kamoto Satoshi;Yoshimoto Sho;Tsuboi Masaya;Yoshitake Ryohei;Eto Shotaro;Ikeda Namiko;Saeki Kohei;Hashimoto Yuko;Takahashi Yosuke;Chambers James;Uchida Kazuyuki;Kaneko Mika K.;Fujita Naoki;Nishimura Ryohei;Kato Yukinari;Nakagawa
• 通讯作者: Nakagawa