Antigen affinity-dependent regulation of B cell antigen receptor signaling

B 细胞抗原受体信号传导的抗原亲和力依赖性调节

• 批准号: 20K05231
• 负责人: 金山 直樹
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K05231/
• 关键词: DT40; affinity; antibody; B cell receptor; 抗体; 抗原レセプター; カルシウムシグナル; 親和性

本研究では、抗原レセプターと抗原との親和性に依存したシグナル調節機構を明らかにして、生体内の抗体産生系の新規な細胞選択機構を見し、これを応用して抗原レセプターシグナルの強度を細胞生存シグナルの強度に変換し、生体内での高親和性抗体の高効率な選択機構を模倣する技術を開発する。本研究では、DT40細胞を用いて抗原への親和性に依存した抗原レセプターシグナル調節機構を解明し、この知見を利用した有用な目的抗体の高効率選択技術を開発する。抗原レセプター刺激に依存して誘導されるNR4A1 (nuclear receptor 4A1)の転写に必要なシグナル経路ついて、プロモーターに蛍光タンパク質遺伝子を連結したレポーターを用いて前年度に引き続いて詳細に関与するシグナル伝達経路について探索した。その結果、前年度までに明らかにしていたカルシニューリンだけでなく、PKC下流のMAPK経路も関与していることを明らかにした。最終的な遺伝子の発現調節領域の同定とシグナル経路の関与も解析を進めている。抗原レセプター刺激に依存して発現される遺伝子について、公的データベース上のDT40細胞を用いた関連研究のトランスクリプトーム解析データから絞り込んだ遺伝子群を、本研究の実験系において検証して発現誘導される候補遺伝子を同定した。前年度までに、これらの発現誘導には、カルシウムシグナル下流の異なるシグナル経路関与していることを見出していたが、BCRの刺激強度の違いによっても用いるシグナル経路の寄与が変化することを見出した。今後、これらの遺伝子のレポーター系を構築して、BCRの親和性認識の検出に有用な遺伝子を決定する。

在本研究中，我们将阐明依赖于抗原受体与抗原之间的亲和力的信号调节机制，发现体内抗体生产系统中的新细胞选择机制，并将其应用于控制抗原受体信号的强度。开发一种能够转换细胞生存信号强度并模仿体内高亲和力抗体高效选择机制的技术。在本研究中，我们将使用DT40细胞来阐明依赖于抗原亲和力的抗原受体信号调节机制，并利用这些知识开发一种高效选择有用目标抗体的技术。继去年的基础上，我们将使用启动子上连接有荧光蛋白基因的报告基因，继续详细研究NR4A1（核受体4A1）转录所涉及的信号转导途径，NR4A1是根据抗原受体刺激而诱导的。我探索了。结果表明，不仅涉及前年发现的钙调神经磷酸酶，而且还涉及PKC下游的MAPK通路。我们还在继续进行最终基因表达调控区的鉴定以及信号通路参与的分析。关于根据抗原受体刺激而表达的基因，在本研究的实验系统中验证了从使用公共数据库上的DT40细胞的相关研究的转录组分析数据中筛选出的一组基因，并鉴定了候选基因。基因。直到前一年，我们才发现钙信号下游的不同信号通路参与了这些表达的诱导，但我们还发现所使用的信号通路的贡献根据BCR刺激的强度而变化。未来，我们将为这些基因构建报告系统，并确定哪些基因可用于检测BCR亲和识别。

项目成果

B細胞抗原レセプターシグナル誘導性分子の発現に必要なシグナル伝達経路

B细胞抗原受体信号诱导分子表达所需的信号转导途径

• 发表时间: 2022
• 作者: 安福 希 ; 伊藤 雄大 ; 小野 和奏 ; 大塚 里美 ; 曲 正樹 ; 波多野 直哉 ; 徳光 浩 ; 金山 直樹
• 通讯作者: 金山 直樹

抗原レセプターシグナル依存的に発現するオーファンレセプターNR4A1のB細胞における発現制御機構の解明

阐明 B 细胞中以抗原受体信号依赖性方式表达的孤儿受体 NR4A1 的表达控制机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 伊藤 雄大 ; 野田 凌太郎 ; 長門 直希 ; 安福 希 ; 大塚 里美 ; 曲 正樹 ; 波多野 直哉 ; 徳光 浩 ; 金山 直樹
• 通讯作者: 金山 直樹

188抗原レセプターシグナル依存的に発現するオーファンレセプターNR4A1のB細胞における発現制御機構の解明

阐明 B 细胞中以 188 抗原受体信号依赖性方式表达的孤儿受体 NR4A1 的表达控制机制

• 发表时间: 2020
• 作者: 秋山 美咲;大森 晴斗;梶浦 雄也;石橋 朋之;久原 亜弓;曲 正樹;波多野 直哉;徳光 浩;金山 直樹;野田凌太郎，曲 正樹，徳光 浩，金山直樹
• 通讯作者: 野田凌太郎，曲 正樹，徳光 浩，金山直樹

Substrate recognition by Arg/Pro‐rich insert domain in calcium/calmodulin‐dependent protein kinase kinase for target protein kinases

• DOI: 10.1111/febs.16467
• 发表时间: 2022-05
• 期刊: The FEBS Journal
• 作者: Riku Kaneshige;Satomi Ohtsuka;Yuhei Harada;Issei Kawamata;M. Magari;N. Kanayama;N. Hatano;H. Sakagami;H. Tokumitsu

Conformation-Dependent Reversible Interaction of Ca2+/Calmodulin-Dependent Protein Kinase Kinase with an Inhibitor, TIM-063

Ca2/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶与抑制剂 TIM-063 的构象依赖性可逆相互作用

• DOI: 10.1021/acs.biochem.1c00796
• 发表时间: 2022
• 期刊: Biochemistry
• 影响因子: 2.9
• 作者: Araya Kibrom Desta;Shuji Ohira;Ismail Arai;Kazutoshi Fujikawa;Satomi Ohtsuka;Taisei Okumura;Yuna Τabuchi;Tomoyuki Miyagawa;Naoki Kanayama;Masaki Magari;Naoya Hatano;Hiroyuki Sakagami;Futoshi Suizu;Teruhiko Ishikawa;Hiroshi Tokumitsu
• 通讯作者: Satomi Ohtsuka;Taisei Okumura;Yuna Τabuchi;Tomoyuki Miyagawa;Naoki Kanayama;Masaki Magari;Naoya Hatano;Hiroyuki Sakagami;Futoshi Suizu;Teruhiko Ishikawa;Hiroshi Tokumitsu