小分子結合ペプチドの分子進化工学的スクリーニング探索とバイオイメージングへの応用

分子进化工程筛选小分子结合肽及其在生物成像中的应用

基本信息

批准号：
20J22783
负责人：
山本美月
金额：
$ 1.79万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに、PURE（Polypeptide synthesis Using Recombinant Elements）システムにより調製した数兆種類のcDNAディスプレイ型ペプチドタグライブラリーからのSELEXスクリーニングにより同定した新規小分子結合ペプチドタグについて、動物細胞内に発現させた合成小分子反応性ペプチドタグ融合タンパク質を、蛍光プローブで修飾した合成小分子で処理し、蛍光顕微鏡観察を行なった結果、合成小分子反応性ペプチドタグに特異的に蛍光ラベルがされていること、複数種類の動物細胞株（HEK293、COS-7、HeLa等）内で蛍光ラベル・イメージングが可能であること、様々なタンパク質（核局在GFP、チューブリン、ヒストン等）を蛍光ラベル・イメージング可能であること、複数種類の蛍光プローブ（青色クマリン、緑色フルオレセイン、赤色TMR、近赤外SiR等）で蛍光ラベル・イメージング可能であることが判明していた。そこで更に、動物細胞内に発現させた合成小分子反応性ペプチドタグ融合タンパク質を、ユビキチンリガーゼ結合リガンドで修飾した合成小分子で処理し、蛍光顕微鏡観察や免疫ブロッティング、発光測定による解析を行なった結果、様々なタンパク質（GFP、核局在GFP、アクチン、チューブリン、ヒストン、ルシフェラーゼ等）の分解誘導によるノックダウンが可能であること、複数種類の動物細胞株（HEK293、COS-7、HeLa等）内で分解誘導によるノックダウンが可能であることが判明した。本研究成果は、日本農芸化学会2023年度大会および第74回日本生物工学会大会の学会で成果発表を行なっている。

到目前为止，我们一直在使用纯净（使用重组的多肽合成，用于新型的小分子结合肽标签，这是由SELEX筛选鉴定出的，这是由SELEX筛选从数万亿个由元素的cDNA-脱位肽标签库中制备的元素制备的元素，合成的小分子反应的肽蛋白在动物中表现出的分子蛋白质，并具有综合蛋白质，该蛋白质的合成小分子蛋白质是小分子的，这些蛋白质是小分子的，该蛋白质是小分子的，该蛋白质是小分子的，这些蛋白质是小分子的分子，该蛋白质是综合蛋白质的，该蛋白质是小分子的，该蛋白质是小分子的，该蛋白质是小分子。 fluorescent microscopy, and the results showed that synthetic small molecule-reactive peptide tags are specifically fluorescently labeled, that fluorescent label imaging can be performed within multiple animal cell lines (HEK293, COS-7, HeLa, etc.), that various proteins (nuclear localized GFP, tubulin, histones, etc.) can be performed with fluorescent label imaging, and that fluorescent label imaging可以用多个荧光探针（蓝色香豆素，绿色荧光素，红色TMR，近红外的SIR等）进行，此外和发光测量结果，并且发现通过降解诱导各种蛋白质（GFP，核局部GFP，肌动蛋白，微管蛋白，组蛋白，荧光素酶等）敲低，以及多种动物细胞系（HEK293，cos-7，Hela等）内部降解诱导而被降解诱导。这项研究的结果是在日本农业化学学会的2023会议上和日本生物工程学会第74届会议上提出的。

项目成果

期刊论文数量（24）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

PUREシステムとmRNAディスプレイ法を用いた新規PD-L1/PD-1間相互作用阻害剤の探索と機能解析

使用 PURE 系统和 mRNA 展示方法搜索新型 PD-L1/PD-1 相互作用抑制剂并进行功能分析

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
安東丈洋;横山匠;岩本莉奈;冨士大輔;山本美月;川上隆史
通讯作者：
川上隆史

新規小分子結合ペプチドタグの開発と生細胞内タンパク質イメージングおよびノックダウンへの応用

新型小分子结合肽标签的开发及其在活细胞内蛋白质成像和敲除中的应用

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
山本美月;安東丈洋;高守幸男;Vedi Santhana;佐藤将;横山匠;冨士大輔;川上隆史
通讯作者：
川上隆史

In?vitro display evolution of IL-6R-binding unnatural peptides ribosomally initiated and cyclized with m-(chloromethyl)benzoic acid

核糖体引发并用间（氯甲基）苯甲酸环化的 IL-6R 结合非天然肽的体外展示进化

DOI：
10.1016/j.bbrc.2020.11.123
发表时间：
2021
期刊：
Biochemical and Biophysical Research Communications
影响因子：
3.1
作者：
Takamori Yukio;Ando Takehiro;Fuji Daisuke;Yokoyama Takumi;Yamamoto Mizuki;Kawakami Takashi
通讯作者：
Kawakami Takashi

血管新生阻害のための新規VEGFR2/VEGF間相互作用阻害剤の探索と機能解析

抑制血管生成的新型 VEGFR2/VEGF 相互作用抑制剂的搜索和功能分析

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
横山匠;安東丈洋;堀内大輔;冨士大輔;山本美月;川上隆史
通讯作者：
川上隆史

In vitro display evolution of unnatural peptides spontaneously cyclized via intramolecular nucleophilic aromatic substitutions

通过分子内亲核芳香取代自发环化非天然肽的体外展示进化

DOI：
10.1039/d2cc00584k
发表时间：
2022
期刊：
Chemical Communications
影响因子：
4.9
作者：
Yokoyama Takumi;Ando Takehiro;Takamori Yukio;Fuji Daisuke;Sato Masashi;Vedi Santhana;Yamamoto Mizuki;Kawakami Takashi
通讯作者：
Kawakami Takashi