標的タンパク質結合ペプチド群の同時同定を可能にする新規スクリーニング技術の開発

开发新的筛选技术，能够同时鉴定目标蛋白结合肽组

• 批准号: 22KJ1488
• 负责人: 横山 匠
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ1488/
• 关键词: Directed evolution; SELEX; PUREシステム; mRNAディスプレイ; in vitro virus; 遺伝暗号拡張技術; VEGF; VEGFR2

標的タンパク質結合ペプチド群の同時同定を可能にする新規スクリーニング技術の開発に利用するモデル標的タンパク質結合ペプチドとして、新規Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2（VEGFR2）結合環状ペプチド化合物のSELEXスクリーニングを行なった。具体的には、微生物由来の再構成型のin vitro転写・翻訳共役システム（Polypeptide synthesis Using Recombinant Elememts system, PUREシステム）と遺伝暗号拡張技術とin vitro virus (mRNAディスプレイ)法を取り入れた分子進化工学的スクリーニング（Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment, SELEX）法を用いて、VEGFR2に結合する新規非天然型環状ペプチド化合物を同定することに成功した。また、同定した新規VEGFR2結合環状ペプチド化合物が、VEGF/VEGFR2間相互作用を阻害すること、VEGFR2発現細胞HUVEC内のVEGF依存的なVEGFR2リン酸化活性をアンタゴナイズすること、HUVECのVEGF依存的な細胞増殖を阻害することも発見した。本研究成果は、日本農芸化学会2023年度大会および第74回日本生物工学会大会の学会で成果発表を行なっている。また、査読付き学術論文であるChemical Communications誌に掲載される研究成果発表も併せて行なっている。

我们对新型血管内皮生长因子受体 2 (VEGFR2) 结合环肽化合物进行了 SELEX 筛选，作为模型靶蛋白结合肽，用于开发新的筛选技术，从而能够同时鉴定靶蛋白结合肽组。具体来说，我们正在开发分子进化工程，该工程结合了源自微生物的重组体外转录/翻译偶联系统（使用重组Elememts系统的多肽合成，PURE系统）、遗传密码扩展技术和体外病毒（mRNA展示）方法。通过指数富集配体系统进化 (SELEX)，我们成功鉴定了一种与 VEGFR2 结合的新型非天然环肽化合物。此外，所鉴定的新型 VEGFR2 结合环肽化合物可抑制 VEGF/VEGFR2 相互作用，拮抗 HUVEC（表达 VEGFR2 的细胞）中 VEGF 依赖性 VEGFR2 磷酸化活性，以及​​ HUVEC 中 VEGF 依赖性细胞肽。 。该研究成果将在日本农业化学学会2023年年会和日本生物工程学会第74届年会上公布。我们还发表在同行评审学术期刊《化学通讯》上发表的研究成果。

项目成果

血管新生阻害がん治療薬開発のための新規VEGF/VEGFR2間相互作用阻害ペプチドのSELEX法による探索と機能解析

使用 SELEX 方法搜索和功能分析新型 VEGF/VEGFR2 相互作用抑制肽，用于开发血管生成抑制癌症疗法

• 发表时间: 2023
• 作者: 横山匠;安東丈洋;高守幸男;Vedi Santhana;王桐;冨士大輔;山本美月;川上隆史
• 通讯作者: 川上隆史

In vitro display evolution of unnatural peptides spontaneously cyclized via intramolecular nucleophilic aromatic substitutions

通过分子内亲核芳香取代自发环化非天然肽的体外展示进化

• DOI: 10.1039/d2cc00584k
• 发表时间: 2022
• 期刊: Chemical Communications
• 影响因子: 4.9
• 作者: Yokoyama Takumi;Ando Takehiro;Takamori Yukio;Fuji Daisuke;Sato Masashi;Vedi Santhana;Yamamoto Mizuki;Kawakami Takashi
• 通讯作者: Kawakami Takashi

Artificial aptamer that inhibits interleukin-23/interleukin-23 receptor interaction discovered via SELEX

通过 SELEX 发现抑制白细胞介素 23/白细胞介素 23 受体相互作用的人工适体

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2022.05.012
• 发表时间: 2022
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Takamori Yukio;Ando Takehiro;Sato Masashi;Vedi Santhana;Fuji Daisuke;Yokoyama Takumi;Tsukamoto Keita;Yamamoto Mizuki;Kawakami Takashi
• 通讯作者: Kawakami Takashi

Discovery of IL-5-binding unnatural cyclic peptides from multiple libraries by directed evolution

通过定向进化从多个文库中发现 IL-5 结合非天然环肽

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2022.04.043
• 发表时间: 2022
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Fuji Daisuke;Ando Takehiro;Sato Masashi;Vedi Santhana;Takamori Yukio;Yokoyama Takumi;Yamamoto Mizuki;Kawakami Takashi
• 通讯作者: Kawakami Takashi

ペプチド医薬品開発のための新規ペプチド環状化法の開発と非天然型環状ペプチドSELEX への応用

肽环化新方法用于肽类药物开发及应用非天然环肽SELEX

• 发表时间: 2022
• 作者: 高守幸男;冨士大輔;安東丈洋;横山匠;佐藤将;ベディサンタナ;山本美月;川上隆史
• 通讯作者: 川上隆史