発がんにおけるDNA N6メチルアデノシンの意義：がん治療の新規作用点となるか？

DNA N6 甲基腺苷在致癌作用中的意义：它能否成为癌症治疗的新作用点？

基本信息

批准号：
20J01824
负责人：
小林良祐
金额：
$ 3.08万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J01824/
关键词：
メチル化 CRISPR がんエピジェネティクス

项目摘要

原核細胞生物のゲノムではN6メチルアデノシンは主要なDNAメチル化修飾であるのに対し、ヒトやマウスなどの哺乳動物細胞では、DNA中のN6メチルアデノシン存在量はきわめて少なく、その生物学的意義はほとんどわかっていない。最終年度となる2022年度はがん遺伝子やがん抑制遺伝子の候補についてin vivoで機能解析を行うための手法として、子宮内膜in vivoゲノム編集法の確立をさらに進めた。複数のがん抑制遺伝子を同時にゲノム編集することにより３ヶ月で子宮がんを誘発できること、標的とする遺伝子を変更することにより性質の異なるがんを作製できることを示し、国際学術誌に報告した（Kobayashi et al., 2022, Int J Cancer）。しかし昨年に報告した通り、上記手法でDNA N6メチルアデノシン関連遺伝子のノックアウトを試みても明確な発がん促進や抑制の証拠は得られていない。哺乳動物細胞において、N6メチルアデノシン修飾はゲノムDNAよりむしろRNA中に豊富に存在する。RNAにおけるN6メチルアデノシン修飾とがんとの関連を調査するため、子宮特異的Mettl14（RNA N6メチルアデノシン転移酵素）ノックアウトマウスを作製した。Mettl14ノックアウトマウスでの子宮がん発症は現在まで認められていないが、子宮では自然免疫活性化による炎症反応促進が認められ、このマウスは着床不全による不妊の表現型を呈した。現在は免疫活性化および着床不全の原因について分子生物学的解析を進めている。

在原核生物的基因组中，N6甲基腺苷是一种主要的DNA甲基化修饰，而在人类和小鼠等哺乳动物细胞中，N6甲基腺苷在DNA中的丰度极小，其生物学意义仍知之甚少。在2022财年，即该项目的最后一年，我们将进一步推进子宫内膜体内基因组编辑方法的建立，作为癌基因和抑癌基因候选物体内功能分析的方法。我们证明，通过同时编辑多个抑癌基因的基因组，可以在三个月内诱发子宫癌，并且通过改变靶基因可以产生不同特征的癌症，我们在国际学术期刊上报道了这一点（Kobayashi等人） .，2022 年，国际癌症杂志）。然而，正如我们去年报道的，使用上述方法敲除DNA N6甲基腺苷相关基因的尝试尚未产生促进或抑制癌发生的明确证据。在哺乳动物细胞中，N6 甲基腺苷修饰在 RNA 而非基因组 DNA 中丰富。为了研究 RNA 中 N6 甲基腺苷修饰与癌症之间的关系，我们培育了子宫特异性 Mettl14（RNA N6 甲基腺苷转移酶）基因敲除小鼠。迄今为止，尚未在 Mettl14 敲除小鼠中观察到子宫癌的发生，但由于先天免疫激活，子宫内炎症反应得到促进，并且这些小鼠因着床失败而表现出不孕表型。目前，我们正在对免疫激活和植入失败的原因进行分子生物学分析。

项目成果

期刊论文数量（17）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Efficient Detection of Flox Mice Using In Vitro Cre Recombination

利用体外 Cre 重组有效检测 Flox 小鼠

DOI：
10.1007/978-1-0716-3016-7_12
发表时间：
2023
期刊：
Methods in Molecular Biology
影响因子：
0
作者：
Kobayashi Ryosuke;Horii Takuro;Hatada Izuho
通讯作者：
Hatada Izuho

交配を必要としない条件付きノックアウトマウス作製に向けた試み：3段階式ゲノム編集

尝试创造不需要交配的条件敲除小鼠：三步基因组编辑

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
小林良祐 ; 堀居拓郎 ; 末友恵理子 ; 木村美香 ; 森田純代 ; 畑田出穂
通讯作者：
畑田出穂

生体内ゲノム編集による効率的な子宮癌発症マウス作出法

利用体内基因组编辑产生子宫癌小鼠的有效方法

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

ヒト子宮内膜がん細胞におけるKMT2変異の意義

人子宫内膜癌细胞中KMT2突变的意义

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
小林良祐;川端麗香;杉山真言;横堀武彦;森田純代;堀居拓郎;西山正彦;畑田出穂
通讯作者：
畑田出穂

Improvement in identification of pro-estrous mice by using a novel method of detecting vaginal mucous cells.

通过使用检测阴道粘液细胞的新方法改进发情前小鼠的识别。

DOI：
10.1007/s00441-020-03310-w
发表时间：
2021
期刊：
Cell and tissue research
影响因子：
3.6
作者：
Makoto Sugiyama;Arata Yasunaga;Ryosuke Kobayashi;Hanae Fukasawa;Osamu Hashimoto;Shiro Kurusu;Hiroshi Sasada;Kazuki Yoshioka
通讯作者：
Kazuki Yoshioka