細胞内の創薬ターゲットに対するがん細胞選択的な膜透過抗体医薬の開発

细胞内药物靶标的癌细胞选择性膜渗透性抗体药物的开发

• 批准号: 20H04535
• 负责人: 土居 信英
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H04535/
• 关键词: 蛋白質; 核酸; 癌; バイオテクノロジー; 共焦点顕微鏡

当該課題の計画では、これまで創薬ターゲットとすることが困難であった ('undruggable') がん細胞内の疾患標的に結合するヒトVH単一ドメイン抗体（以下、小型抗体）を、がん細胞選択的に細胞内に送達させることで、２重の鍵をもつきわめて副作用の少ないがん細胞選択的膜透過抗体医薬を開発するために、以下の３つの項目について研究を進めた。(1) mRNAディスプレイ法によるがん細胞表面マーカーにpH依存的に結合する小型抗体の創出。(2)ヒト由来膜透過促進ペプチドのメカニズム解析および活性向上。(3)細胞内疾患標的に結合する小型抗体の創出および選択的膜透過性の付与。前年度までに項目(1)と項目(2)の検討はほぼ完了したため、３年目は項目(3)の検討に注力した。具体的には、前年度までに検討してきた前立腺がんの悪性化に関与するアンドロゲン受容体スプライスバリアント7 (AR-V7) に結合する抗体医薬に加え、リスクヘッジするために核酸医薬についても検討を進め、膜透過促進ペプチドを融合したAgo2をキャリアとしてAR-V7に対するsiRNAを前立腺がん由来LNCaP細胞に効率よく送達し、従来法よりも迅速に標的mRNAをノックダウンすることに成功した (J. Nanobiotechnol. 20, 458, 2022)。また、本手法の汎用性を示すために、'undruggable'な疾患標的として代表的なMYCに結合する小型抗体や、細胞表面マーカーとして肝細胞特異的に発現しているアシアロ糖タンパク質受容体（ASGR）に結合する小型抗体もmRNAディスプレイ法により取得した (学会発表)。さらに、膜透過促進ペプチドとASGR抗体を組み合わせることで、ペプチド医薬の肝細胞選択的なデリバリーに成功した (J. Biol. Chem. 298, 102097, 2022)。

在问题的计划中，很难靶向药物发现（“不可能”）癌症vh单域抗体（以下称为小抗体）与癌细胞中的疾病结合。具有少量副作用的药物，通过选择性选择细胞对细胞选择细胞来开发双键。 （1）创建一种小抗体，该抗体通过mRNA显示方法结合了pH值依赖于癌细胞表面标记。 （2）机理分析和改善人类起源膜传递促进肽。 （3）创建小抗体和选择性膜通透性的结合，作为细胞内疾病靶标。到上一年，对项目（1）和项目（2）的检查几乎完成了，因此在第三年，我们专注于检查项目（3）。具体而言，除了与恶性前列腺癌中涉及的雄激素受体Sprice 7（AR-V7）结合的抗体药物外，我们还研究了核酸药物的风险。促进肽作为载体，我们将siRNA有效地传递到了前列腺癌衍生的LNCAP细胞中，并成功地击倒了靶mRNA的速度比常规方法（J）。 。此外，为了显示这种方法的多功能性，一种与典型MYC结合为“不可用”疾病靶标的小抗体和肝细胞受体（ASGRR（ASGR）（ASGR（ASGR）（ASGR）（ASGR）））获得将与mRNA显示的抗体（会议宣布）。此外，通过结合膜传递促进肽和ASGR抗体，肽药物的肝细胞递送成功（J. Biol。Chem。298，102097，2022）。

项目成果

Guanine nucleotide exchange factor DOCK11-binding peptide fused with a single chain antibody inhibits hepatitis B virus infection and replication.

• DOI: 10.1016/j.jbc.2022.102097
• 发表时间: 2022-07
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Ide, Mayuko;Tabata, Noriko;Yonemura, Yuko;Shirasaki, Takayoshi;Murai, Kazuhisa;Wang, Ying;Ishida, Atsuya;Okada, Hikari;Honda, Masao;Kaneko, Shuichi;Doi, Nobuhide;Ito, Satoru;Yanagawa, Hiroshi
• 通讯作者: Yanagawa, Hiroshi

がん細胞選択的DDSに向けたEGFRに対する環境応答性単一ドメイン抗体の創出

创建针对 EGFR 的环境响应性单域抗体，用于癌细胞选择性 DDS

• 发表时间: 2021
• 作者: Sachiko Shiba;Kazuhiro Ikeda;Kuniko Horie-Inoue;Kotaro Azuma;Tomoka Hasegawa;Norio Amizuka;Tomoaki Tanaka;Toshihiko Takeiwa;Yasuaki Shibata;Takehiko Koji;Satoshi Inoue;明石尚之，清野真梨子，藤原慶，土居信英
• 通讯作者: 明石尚之，清野真梨子，藤原慶，土居信英

PURE mRNAディスプレイ法によるヒトVH単一ドメイン抗体ライブラリーの試験管内選択

PURE mRNA展示法体外筛选人VH单域抗体文库

• 发表时间: 2022
• 作者: 中村順也;有馬英俊;香月正明;入倉 充;加藤里花子，藤原慶，土居信英
• 通讯作者: 加藤里花子，藤原慶，土居信英

膜透過性ペプチドを用いたCas9タンパク質-gRNA複合体の直接的な細胞内送達

使用膜渗透肽直接细胞内递送 Cas9 蛋白-gRNA 复合物

• 发表时间: 2020
• 作者: Yuga Hashimoto;Mikio Matsuhiro;Hidenobu Suzuki;Yoshiki Kawata;Yoshinori Ohtsuka;T Kishimoto;Kazuto Ashizawa;Noboru Niki;古屋智規，藤原慶，土居信英
• 通讯作者: 古屋智規，藤原慶，土居信英

細胞選択的なタンパク質デリバリーのためのヒト・シンシチン1由来膜透過促進ペプチドの最適化

用于细胞选择性蛋白质递送的人合胞素 1 衍生膜透化肽的优化

• 发表时间: 2020
• 作者: 前村帆南，藤原慶，土居信英