The elucidation of mechanisms and the development of novel therapeutic methods for mutant p53-induced EMT in lung cancer

突变p53诱导肺癌EMT的机制阐明和新治疗方法的开发

• 批准号: 20H03770
• 负责人: 毛受 暁史
• 金额: $ 11.07万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03770/
• 关键词: EGFR; p53遺伝子変異; 上皮間葉転換（EMT）; Transgenic mouse; 薬剤スクリーニング; p53変異; RNA-seq; 浸潤転移能; 肺癌; 浸潤転移; 上皮間葉転換; 上皮間葉転換（EMT); 変異p53誘導; 肺癌悪性化; p53; 薬剤耐性; 上皮間葉転換 （EMT); 変異p53; スタチン

2022年度は、p53変異によるEMT活性化の相違を解析することで、EMTがどのよう経路が活性化しているかについて明らかに使用としている。今回、機能亢進型や機能抑制型など様々なタイプの変異型p53ベクターの作成を行い、現在まで合計10種類のHotspot変異型p53ベクターを作成した。それらのベクターによる肺癌細胞株への遺伝子導入を行い、structural type mutationよりもcontact type mutationでEMT活性が亢進していることが確認された。このうち、最もEMT活性化がみられる２種類やEMT活性みられない変異、negative controlの４種類のtransformed cellsをRNA-seq/miRNA-seqを行い、EMT活性化がみられるtypeにおける活性化経路を見出した。またEMTの際に活性化するシグナル経路であるArf6-AMAP1経路とPD-L1発現について解析を進めた。結果、AMAP1発現低下により、negative feedbackと考えられるEGFR経路の活性化が起こり、その結果として、PD-L1発現が上昇することを見出した。次にluciferaseを利用したpromoter reporter assayによるhigh through-put screeningの系を立ち上げ、TGFb誘導性EMT抑制薬として、７種類のcompoundを見出し、そのうち３種類はTGFb受容体阻害剤であり、我々の系の有効性が示され、これを論文化した。この系をEMTを起こす様々な細胞株に応用し、同様の実験を行うことを計画している。またEGFR変異transgenic mouseとp53変異transgenic mouseを入手し、それぞれの遺伝子型を確認して、交配をすすめている。

在 2022 财年，我们将通过分析 p53 突变导致的 EMT 激活差异来阐明 EMT 途径是如何激活的。这次，我们创建了各种类型的突变型p53载体，包括过度活跃型和功能抑制型，迄今为止我们总共创建了10种类型的Hotspot突变型p53载体。我们使用这些载体将基因引入肺癌细胞系，并证实接触型突变中的 EMT 活性比结构型突变中的 EMT 活性更强。其中，我们对四种类型的转化细胞进行了 RNA-seq/miRNA-seq：EMT 激活最高的两种类型、无 EMT 活性的突变以及阴性对照，并确定了 EMT 激活类型 I 中的激活途径。发现了。我们还分析了 Arf6-AMAP1 通路（EMT 期间激活的信号通路）和 PD-L1 表达。结果，我们发现AMAP1表达减少会导致EGFR通路激活，这被认为是负反馈，结果，PD-L1表达增加。接下来，我们利用荧光素酶启动子报告基因测定建立了高通量筛选系统，发现了七种化合物作为TGFb诱导的EMT抑制剂，其中三种是TGFb受体抑制剂。该系统的有效性得到了证明，并发表在《2017》上。一张纸。我们计划将该系统应用于引起EMT的各种细胞系并进行类似的实验。我们还获得了一只EGFR突变转基因小鼠和一只p53突变转基因小鼠，确认了它们的基因型，并正在进行杂交育种。

项目成果

Lung cancer and epithelial-mesenchymal transition

• DOI: 10.1007/s11748-021-01595-4
• 发表时间: 2021-03-22
• 期刊: GENERAL THORACIC AND CARDIOVASCULAR SURGERY
• 影响因子: 1.2
• 作者: Menju, Toshi;Date, Hiroshi
• 通讯作者: Date, Hiroshi

High programmed death ligand 1 expression in carcinomatous components predicts a poor prognosis in pulmonary pleomorphic carcinoma

癌成分中程序性死亡配体 1 的高表达预示着肺多形性癌的不良预后

• DOI: 10.1007/s00595-021-02439-7
• 发表时间: 2022
• 期刊: Surgery Today
• 影响因子: 2.5
• 作者: Noguchi Misa;Menju Toshi;Nakajima Naoki;Yoshizawa Akihiko;Ohsumi Akihiro;Nakajima Daisuke;Hamaji Masatsugu;Haga Hironori;Date Hiroshi
• 通讯作者: Date Hiroshi