自己免疫疾患・アレルギー疾患の病態を制御するTIM分子の機能解明

阐明控制自身免疫性疾病和过敏性疾病病理学的 TIM 分子的功能

• 批准号: 20H03472
• 负责人: 秋葉 久弥
• 金额: $ 11.23万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03472/
• 关键词: 免疫; 炎症; アレルギー; 自己免疫疾患; 診断薬; 免疫学; 喘息; アレルギー疾患

私達はこれまでの研究を通じて、細胞膜外で切断される遊離型TIM-4(sTIM-4)の存在を発見し、炎症細胞に発現するLMIR5と結合して、関節炎モデルマウスや喘息モデルマウスの病態形成に深く関わることを明らかにしてきた。そこで本研究は、疾患によってTIM-4を発現する細胞の種類によって炎症の慢性化に特徴的な違いがあるか検討するため、マウスsTIM-4の切断部位を同定し、これを変異させた非遊離型TIM-4マウスを作製して、各種疾患モデルにおける特徴的な機能の違いを検証することを目的とした。また炎症の定量化を目指し、ヒトsTIM-4を高感度に測定する方法を確立し、喘息患者さんなどの血清からヒトsTIM-4を測定して、発症や病態との相関を検討して臨床応用に向けた基盤を構築することも目的とした。これまでに新たにラット抗ヒトTIM-4モノクローナル抗体を作製して、ヒトsTIM-4を高感度に測定することができるサンドイッチELISA法を構築した。順天堂医院膠原病・リウマチ内科、及びバイオリソースバンク活用研究支援講座と連携を取り、順天堂大学医学系研究等倫理委員会承認のもと、膠原病患者さん（関節リウマチ、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、全身性強皮症、多発性筋炎/皮膚筋炎）と健常者から採取された血清中のsTIM-4を測定して、それぞれの疾患の間に差異があるか否か解析を行った。またsTIM-4の切断部位を同定するために、TIM-4-PA/ pCD-PAx3と抗PA抗体-ビーズを用いて切断後に細胞に結合した状態のTIM-4-PAを回収、液体クロマトグラフィー質量分析計を用いてsTIM-4の切断部位の同定を試みたが、タンパク質の回収量が少なかったことから十分な計測ができていない。

通过我们前期的研究，我们发现了游离TIM-4（sTIM-4）的存在，它在细胞膜外被切割，并与炎症细胞中表达的LMIR5结合，导致关节炎模型小鼠中sTIM-4的发展，以及已揭示其与哮喘模型小鼠的发病机制密切相关。因此，在本研究中，我们鉴定了小鼠sTIM-4的裂解位点，并对其进行突变，以检查炎症慢性程度是否因疾病而表达TIM-4的细胞类型存在特征性差异。本研究旨在生成游离 TIM-4 小鼠并检查各种疾病模型中特征性功能差异。此外，以炎症定量为目的，我们建立了高灵敏度测定人类sTIM-4的方法，从哮喘患者等的血清中测定人类sTIM-4，并研究其与发病和病理状况的相关性。目的还在于为应用奠定基础。到目前为止，我们已经创建了一种新型大鼠抗人TIM-4单克隆抗体，并构建了可以高灵敏度测量人sTIM-4的夹心ELISA方法。我们与顺天堂医院胶原病和风湿病科以及生物资源库利用研究支持科合作，经顺天堂大学研究伦理委员会批准，正在对胶原病患者（类风湿性关节炎、干燥病）进行研究医学院。我测量了健康受试者血清中的 sTIM-4，并分析了这些疾病之间是否存在差异。为了鉴定sTIM-4的切割位点，使用TIM-4-PA/pCD-PAx3和抗PA抗体-珠在切割后回收与细胞结合的TIM-4-PA，并进行了液相色谱法的尝试。使用质谱仪鉴定了 sTIM-4 切割位点，但由于回收的蛋白质量较少，无法进行足够的测量。

项目成果

喘息モデルマウスにおけるキチン誘導性ステロイド抵抗性気道炎症の解析

几丁质诱导的哮喘模型小鼠类固醇抵抗性气道炎症分析

• 发表时间: 2020
• 作者: 竹重智仁;原田紀宏;石森絢子;松野圭;原田園子;笹野仁史;田辺悠記;三道ユウキ;桂蓉子;牧野文彦;伊藤潤;秋葉久弥;高橋和久
• 通讯作者: 高橋和久

順天堂大学医学部免疫学講座

顺天堂大学医学院免疫学系

Chitin induces steroid-resistant airway inflammation and airway hyperresponsiveness in mice

甲壳素诱导小鼠类固醇抵抗性气道炎症和气道高反应性

• DOI: 10.1016/j.alit.2020.12.004
• 发表时间: 2021
• 期刊: Allergology International
• 影响因子: 6.8
• 作者: Takeshige Tomohito;Harada Norihiro;Harada Sonoko;Ishimori Ayako;Katsura Yoko;Sasano Hitoshi;Sandhu Yuuki;Matsuno Kei;Makino Fumihiko;Ito Jun;Atsuta Ryo;Akiba Hisaya;Takahashi Kazuhisa
• 通讯作者: Takahashi Kazuhisa

University of Wisconsin/University of Pittsburgh/The Washington University(米国)

威斯康星大学/匹兹堡大学/华盛顿大学（美国）

スギ花粉症合併喘息患者における舌下免疫療法による症状改善効果と末梢血リンパ球分画の変化

舌下免疫治疗哮喘合并柳杉花粉过敏患者症状改善效果及外周血淋巴细胞分数变化

• 发表时间: 2022
• 作者: 上田翔子;伊藤潤;原田園子;笹野仁史;三道ユウキ;田辺悠記;安部寿美子;渡邉敬康;佐藤良彦;西牧孝泰;牧野文彦;塩田智美;児玉裕三;長岡鉄太郎;千葉麻子;秋葉久弥;三宅幸子;熱田了;原田紀宏;高橋和久.
• 通讯作者: 高橋和久.