RNA processingを起点にした新規がん治療標的の探索

基于RNA加工寻找新的癌症治疗靶点

基本信息

批准号：
19K24691
负责人：
吉見昭秀
金额：
$ 35.78万
依托单位：
National Cancer Center Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Fund for the Promotion of Joint International Research (Home-Returning Researcher Development Research)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020 至 2021
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K24691/
关键词：
スプライシング因子遺伝子変異 RNA結合蛋白質 SRSF2 SF3B1 白血病神経膠腫

项目摘要

①SRSF2変異による発がん機構の解明：変異型SRSF2により生じるGSTM2およびCIDEB遺伝子のintron retention（IR）部位を含む領域をクローニングしたminigeneを構築し、複数のG-rich配列をC-richに置換した結果、それぞれIRが改善したことから、変異型SRSF2による連続したIRは、その間に位置するexonがG-richのときに起きることが強く示唆された。また、現在、上記のIRに対するAntisense Oligonucleotideを合成し、スプライシング異常の改善および生物学的影響を評価している。②SF変異がないにも関わらずsplicing異常をもつがん：IDH1/2遺伝子変異を有する神経膠腫患者検体においてグローバルなスプライシング異常が生じていることを申請者は発見したが、実際にIDH1R132H変異を神経膠腫細胞株に導入したところ、同様のグローバルなスプライシング異常が誘導され、確かにIDH1変異がスプライシング異常を誘導することが確認された。また、国立がん研究センター中央病院脳脊髄腫瘍科からIDH遺伝子のgenotyping済みの臨床検体を33例入手し、病態の鍵となるスプライシング異常を絞り込むためにRNA sequencingを実施したところである。③RNA結合蛋白質（RBP）の治療標的化検討：各種がんにおけるRBPへのoncogenic addictionを評価するためのRBP CRISPR Screeningを実施するために、スプライシング変異陽性・陰性の各種細胞株K562・Nalm-6（白血病）、U-87（神経膠腫）、MEL270（メラノーマ）、A549（肺癌）、PANC-1（膵癌）細胞にCas9遺伝子を導入し、また約500種類のRBPを標的とするsgRNA libraryの合成を完了した。

①阐明SRSF2突变引起的致癌机制：我们通过克隆SRSF2突变引起的GSTM2和CIDEB基因的内含子保留（IR）位点区域构建了小基因，并用富含C的序列替换了多个富含G的序列。由于每个 IR 均得到改善，因此强烈表明，当位于它们之间的外显子富含 G 时，突变体 SRSF2 会发生连续的 IR。此外，我们目前正在合成上述IR的反义寡核苷酸，并评估剪接异常的改善和生物学效应。 ②无SF突变但存在剪接异常的癌症：申请人发现在IDH1/2基因突变的胶质瘤患者标本中出现了整体剪接异常，但申请人实际上并不存在IDH1R132H突变，当引入胶质瘤细胞系时，也出现了类似的整体剪接异常。被诱导，证实 IDH1 突变确实会诱导剪接异常。此外，我们从国立癌症中心医院脑部和脊柱肿瘤科获得了 33 份临床标本，IDH 基因已在该处进行了基因分型，并进行了 RNA 测序，以缩小病理学关键的剪接异常范围。 ③ RNA结合蛋白（RBP）治疗靶向的检查：RBP CRISPR评估各种癌症中RBP的致癌成瘾性为了进行筛选，使用了具有正剪接突变和负剪接突变的各种细胞系，K562、Nalm-6（白血病）、U-87（神经胶质瘤）、MEL270（黑色素瘤）、A549（肺癌）、PANC-1（胰腺癌）我们将Cas9基因导入细胞，并完成了针对约500种RBP的sgRNA文库的合成。