A new AAV delivery method for gene therapy of hypomyelinaitng leukodystrophy

一种用于低髓鞘脑白质营养不良基因治疗的新 AAV 递送方法

基本信息

批准号：
21H02886
负责人：
井上健
金额：
$ 11.15万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

マイクロバブル超音波併用法は血液脳関門の透過性を一時的に上げることができる薬剤デリバリー技術として脳腫瘍治療領域への開発が進んでいるが、脳室内から脳実質へのAAV透過性を亢進させることも同様に期待できる。そこでマイクロバブル超音波併用法を用いたAAVの脳室内投与の有効性をマウスおよびマーモセットで検証し、特にAAVデリバリーが難しいとされるオリゴデンドロサイトへの安全かつ広範囲高効率なAAVデリバリー技術を確立する。これにより我々が開発を進めてきた先天性大脳白質形成不全症を始め、多くの小児神経難病の遺伝子治療法の実用化に寄与する基盤技術の確立が期待される。本年度は下記の研究を実施した。１）マイクロバブル超音波併用法を用いたAAVの脳室内投与の有効性のマウスでの検証と条件の最適化野生型マウスを用いた有効性検証と条件最適化を行う。AAVはオリゴデンドロサイト特異的にGFPを発現するベクターAAV９-hCNP-PLP1miRNAをした。片側の脳室内にAAVをマイクロバブルと共に投与し、直後に超音波を照射する。２週間後に脳切片を作成し、蛍光シグナルの強度と脳損傷の程度を検証し、安全かつ有効性の高い超音波照射の条件を検索した。

微泡超声组合方法正在脑肿瘤治疗领域开发，作为一种药物递送技术，可以暂时增加血脑屏障的通透性，但它也可以增加AAV从脑室到脑实质的通透性。是可以预料到的。因此，我们利用微泡超声在小鼠和狨猴体内验证了 AAV 的有效性，并建立了一种安全、广泛且高效的 AAV 递送技术，以实现 AAV 递送特别困难的少突胶质细胞。我们希望这将导致一项基础技术的建立，有助于基因治疗方法在许多棘手的儿科神经系统疾病的实际应用，包括我们一直在开发的先天性脑白质发育不良。今年，我们进行了以下研究。 1) 使用微泡超声在小鼠中验证AAV脑室内给药的有效性和优化条件我们将使用野生型小鼠验证有效性并优化条件。 AAV 是一种载体 AAV9-hCNP-PLP1miRNA，在少突胶质细胞中特异性表达 GFP。将 AAV 与微泡一起注入大脑的一侧脑室，并立即照射超声波。两周后制作脑切片，验证荧光信号强度和脑损伤程度，并寻找安全高效的超声照射条件。