B型肝炎ウイルスに感染するマウス肝臓細胞の作製

感染乙型肝炎病毒的小鼠肝细胞的产生

• 批准号: 21H02742
• 负责人: 西辻 裕紀
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02742/
• 关键词: HBV; cccDNA; core; Core

昨年度は組換えHBV Coreタンパク質をビオチン化し、プロテインアレイを行い、HBVの宿主因子としてSSBP3を同定した。本年度はプロテインアレイに加えて、免疫沈降法でHBV coreタンパク質と結合する宿主因子の同定を行った。HBV coreをHepG2およびHuh7細胞で発現させて、免疫沈降を行い、LC-MS/MSによるショットガン解析によって、HBV coreタンパク質と結合する宿主因子の同定を行った。その結果、HepG2細胞で327タンパク質、Huh7細胞で72タンパク質が同定できた。HepG2とHuh7細胞の両方で同定された宿主因子は59タンパク質だった。さらにプロテインアレイでも同定された宿主因子をピックアップした結果、FIP1L1、RBMX、PARP1の3タンパク質が同定できた。これらの宿主因子が実際に細胞内で結合するかを免疫沈降法で確認した結果、3つのタンパク質はHBV coreと結合することが確認できた。これらの3つのタンパク質に対するsiRNAをHpG2-NTCP細胞に導入し、それぞれの因子をノックダウンし、HBVを感染させると、RBMXのみでHBV感染の減少が見られた。

去年，我们对重组 HBV 核心蛋白进行生物素化，进行蛋白芯片分析，并鉴定 SSBP3 为 HBV 宿主因子。今年，除了蛋白质阵列之外，我们还使用免疫沉淀来鉴定与 HBV 核心蛋白结合的宿主因子。 HBV 核心在 HepG2 和 Huh7 细胞中表达，进行免疫沉淀，并使用 LC-MS/MS 通过鸟枪法分析鉴定与 HBV 核心蛋白结合的宿主因子。结果，在 HepG2 细胞中鉴定出 327 个蛋白质，在 Huh7 细胞中鉴定出 72 个蛋白质。在 HepG2 和 Huh7 细胞中均鉴定出 59 个宿主因子。此外，通过提取也使用蛋白质阵列鉴定的宿主因子，鉴定出三种蛋白质：FIP1L1、RBMX 和 PARP1。通过免疫沉淀确认这些宿主因子是否确实在细胞内结合，结果证实这三种蛋白质与HBV核心结合。当针对这三种蛋白的 siRNA 被引入 HpG2-NTCP 细胞中以敲除每个因子并感染 HBV 时，仅使用 RBMX 即可观察到 HBV 感染的减少。