角膜実質細胞の分化における小胞体ストレス応答の働き

内质网应激反应在角膜细胞分化中的作用

• 批准号: 19K18879
• 负责人: 宮城 秀考
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K18879/
• 关键词: 角膜実質細胞; 線維化; 小胞体ストレス; 角膜線維芽細胞; PERK; 筋線維芽細胞; 創傷治癒

マウス胚線維芽細胞を2ng/ml TGF-βで刺激し筋線維芽細胞への分化を促すと、小胞体ストレスマーカーであるBiPやspliced XBP-1の遺伝子発現が誘導されることから、小胞体ストレスが起きていることが示唆された。また、小胞体ストレス応答経路の主要な３つのセンサータンパクであるPERK、IRE1、ATF6それぞれをノックアウト、またはノックダウンしたマウス胚線維芽細胞をTGF-βで刺激し、それぞれの筋線維芽細胞への分化をα-smooth muscle actinの遺伝子発現で評価すると、PERKをノックアウトしたマウス胚線維芽細胞においては発現が抑制された。以上のことから線維芽細胞から筋線維芽細胞への分化には小胞体ストレス応答経路の内、主にPERK経路が関わっていることが示唆された。並行して、野生型マウスの角膜を採取し、disc上で培養することでマウスの角膜実質細胞を分離培養する手技を確立した。また、ヒト強角膜片から角膜実質を切り出し、dish上で培養することで角膜実質から線維芽細胞を初代培養することに成功した。初代培養したヒト角膜実質細胞を様々な条件の器質上で培養するため、ヒト角膜の硬さを模した25ｋPa（正常角膜）と75ｋPa（線維化した角膜）のハイドロゲルを作成する手技を確立した。また、細胞培養可能になるようハイドロゲルの細胞毒性を無くす最適な洗浄法を決定した。その後、新型コロナウイルス感染症流行のため研究は中断していた。この度、研究代表者の異動により研究継続ができなくなったため廃止申請を行った。

当小鼠胚胎 - 胚胎基因被2 ng/ml TGF-β刺激并促进分化为肌肉成纤维细胞时，诱导了BIP和剪接的XBP-1的遗传表达这种压力正在发生。另外，在末尾是三个主要的传感器tumples的PERK，IRE1和ATF6，将其从PERK，IRE1和ATF6中敲出，并用TGF-β刺激它们，并刺激它们到每个肌肉成纤维细胞时。通过α-光滑肌肉肌动蛋白基因表达评估，将表达抑制在小鼠胚胎成纤维细胞中，从而脱离PERK。以上建议，在Vyroidenal应激反应结束时，从成纤维细胞到肌肉成纤维细胞的分化主要参与PERK途径。同时，收集野生型小鼠的角膜并在椎间盘上培养，并确定了分离小鼠角膜细胞的过程。此外，角膜被从人类强角膜片中剪裁出来，并在菜肴上培养，成功地从角膜现实中培养了成纤维细胞。为了在各种条件下培养在第一代培养的真实细胞，建立了25 kPa的水凝胶（正常角膜）和75 kPa（纤维角膜）（纤维角膜）。此外，确定了消除水凝细胞中毒的最佳清洁方法以实现细胞培养。后来，由于新结肠病毒感染的方式，研究中断了。这次，由于研究代表的转移而提出了废除申请，因此不再有可能继续研究。