肺高血圧症の病態におけるインスリン分泌促進ホルモン、その分解酵素の役割は？

胰岛素促分泌剂及其降解酶在肺动脉高压病理学中的作用是什么？

• 批准号: 20K16885
• 负责人: 細川 奨
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16885/
• 关键词: 肺高血圧症; DPP-4阻害薬; caveolin-1; GLP-1受容体作動薬; DPP-4; GLP-1

本研究は、インスリン分泌促進ホルモンであるGLP-1、およびその分解酵素DPP-4が、肺高血圧症の病態に果たす役割を検討し、これらの薬剤の肺高血圧症への治療薬としての可能性を探るものである。2020年度はin vivoでのデータを中心に検討した。モノクロタリン誘発肺高血圧ラットを用いて、GLP-1受容体作動薬、DPP-4阻害薬が肺高血圧症を改善すること、特にこれら２剤の併用が最も生存率が高めることを確認した。続いて研究実施計画に基づき、2021年度は以下の検討を行った。（１）T細胞と肺動脈平滑筋細胞の直接の相互作用の可能性の検討：Flagタグ付きDPP-4プラスミド、およびDPP-4変異プラスミドを作成し、これをHEK293細胞に遺伝子導入、ライセートを作成したのち、肺動脈平滑筋細胞と免疫沈降を行った。この結果、DPP-4と直接作用するのは、肺動脈平滑筋細胞上のcaveolin-1であることが明らかになった。このことから、肺動脈平滑筋細胞の増殖に、CD26・caveolin-1系の相互作用が関与しているという仮説を立て、以下の実験を行なった。（２）T細胞と肺動脈平滑筋細胞の共培養：FGF2で刺激した肺動脈平滑筋細胞とJurkat-CD26細胞株を共培養したところ、Jurkat-parent株との共培養に比べ強い細胞増殖を示す傾向を認めた。2022年度は、実験の進捗状況を考慮し、DPP-4阻害薬を用いて以下の検討を行った。（１）免疫組織化学染色：ラット（コントロール群、モノクロタリン誘発肺高血圧群、モノクロタリン＋DPP-4阻害薬群）の３群を用いて、NF-kB リン酸化p65を比較したところ、モノクロタリン群で優位に肺動脈平滑筋細胞に一致したリン酸化p65の発現増強を認めた。（２）タンパク発現：ヒト肺動脈平滑筋細胞を用いて、TGF-βあるいはFGF2で刺激し、DPP-4阻害薬を投与したところ、リン酸化p65のタンパク発現量はDPP-4阻害薬の濃度依存性に抑制された。

本研究探讨了胰岛素促分泌剂GLP-1及其降解酶DPP-4在肺动脉高压病理学中的作用，并探讨了这些药物作为肺动脉高压治疗药物的潜力。 2020年，我们重点关注体内数据。使用野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠，我们证实GLP-1受体激动剂和DPP-4抑制剂可以改善肺动脉高压，特别是这两种药物的组合可以最大程度地提高生存率。接下来，根据研究实施计划，2021年度进行了以下研究。 (1)检查T细胞和肺动脉平滑肌细胞之间直接相互作用的可能性：创建带Flag标签的DPP-4质粒和DPP-4突变体质粒，将其引入HEK293细胞中，并创建裂解物，然后进行免疫沉淀。是用肺动脉平滑肌细胞进行的。结果表明，肺动脉平滑肌细胞上的caveolin-1直接与DPP-4相互作用。基于此，我们推测CD26与caveolin-1系统的相互作用参与了肺动脉平滑肌细胞的增殖，并进行了以下实验。 (2) T细胞和肺动脉平滑肌细胞的共培养：当FGF2刺激的肺动脉平滑肌细胞与Jurkat-CD26细胞系共培养时，与与Jurkat-CD26细胞系共培养相比，它们往往表现出更强的细胞增殖能力。 Jurkat亲本菌株已被承认。 2022年度，考虑到实验的进展，我们使用DPP-4抑制剂进行了以下研究。 (1)免疫组化染色：比较3组大鼠(对照组、野百合碱诱导肺动脉高压组、野百合碱+DPP-4抑制剂组)NF-kB磷酸化p65的表达情况，发现野百合碱组大鼠中观察到磷酸化p65表达增强。肺动脉平滑肌细胞。 (2)蛋白质表达：当用TGF-β或FGF2刺激人肺动脉平滑肌细胞并施用DPP-4抑制剂时，磷酸化p65的蛋白质​​表达量依赖于DPP-4抑制剂的浓度。性方面有所克制。