血液脳関門の破綻に着目した術後神経認知機能障害の発症機序解明

以血脑屏障破坏为重点阐明术后神经认知功能障碍的发病机制

基本信息

批准号：
21H03025
负责人：
祖父江和哉
金额：
$ 10.9万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H03025/
关键词：
術後神経認知機能障害血液脳関門ミクログリア

项目摘要

昨年度に確立した術後認知機能障害（NCD）モデルが、記憶のどの段階で障害を起こしているのか、新規物体認識試験（NOR）のtrainingとtestの間の時間を変えることで、短期記憶障害の確認をした。通常、NORではtrainingとtestの間は24時間空けるが、15分間に変えて、海馬を主体とした「記銘」の異常を確認できる。その結果、15分間にした場合は、認知機能の低下を認めず、短期記憶障害がないことが分かった。つまり、術後NCDモデルは、記銘の障害はなく、その後の記憶の保持・想起の段階に異常があることが判明した。血液脳関門（BBB）の破綻の部位と時間の検討を行うため、昨年度に引き続き、10kDaデキストランとトマトレクチンを同時に眼窩注することで血液と血管壁の染色をし、血管外への漏出がないか解析したが、デキストランの血管外への漏出を数値化することが困難だった。このため、色素を投与したマウスの脳組織の上清の蛍光輝度の測定に変更した。デキストランは眼窩注の確実性が低いため、フルオレセインの腹腔内投与に変更した。各種プロトコルを試行錯誤し、LPSモデルのBBBの破綻を、最終的にフルオレセインナトリウムの腹腔内投与で測定できるプロトコルを確立した。蛍光輝度の測定と並行して、2光子顕微鏡を用いて、術後NCDモデルのBBBの破綻の観察を行った。最初はフルオレセインの投与で観察を行っていたが、色素の追加投与の際に、残存色素があることから、投与後6時間で残存色素がなくなり、追加投与が可能なフルオレセインナトリウムに変更した。予備実験の22週齢の術後NCDモデルで、術後の血管外の色素の輝度値の上昇を認め、これがBBBの破綻であるか精査中である。また、この後に予定しているqAIM-MRI法や脳波の測定については、BBBの破綻部位と時間が判明次第、速やかに実施できるように準備を行った。

短期记忆障碍通过改变训练和测试之间的时间，术后认知功能障碍（NCD）模型，并在新的身体识别测试中建立了训练和测试之间的时间。通常，在训练和测试之间每天24小时也不可用，但可以更改为15分钟，以确认主要由海马的“笔记”的异常。结果，发现在15分钟内，认知功能没有降低，并且没有短期记忆障碍。换句话说，术后NCD模型在铭文中没有障碍，并且发现随后记忆的维护和回忆阶段存在异常。从去年继续检查血液屏障的破产部分和时间，血液和血管通过使用10KDA脱脂蛋白和番茄trectin的同时染色，尽管进行了血管，但很难分析。量化葡萄糖外血管的泄漏。因此，将其更改为小鼠小鼠的脑组织，该小鼠被施用到浅荧光上。由于轨道订购的可能性低，葡聚糖已更改为荧光内荧光素内的荧光内施用。经过各种协议的反复试验和误差，我们建立了一项协议，该方案最终可以通过全部的矿石天鹅的内部拉pon子给药来衡量LPS模型BBB的崩溃。与荧光亮度的测量平行，使用两个光学显微镜观察到术后NCD模型的BBB。首先，通过给药荧光素观察到，但是在添加色素时，剩余的颜料。初步实验中22周-OLD NCD的术后NCD模型承认术后色素的亮度值的增加，并且正在仔细检查是否是BBB失败。此外，准备此后计划的Qaim-MRI方法和脑电波的测量值，以便在发现BBB失败的位点和时间后立即实施。