細胞接着因子を標的とするデュアル修飾型アンチセンス核酸を用いた革新的癌治療薬創出

使用靶向细胞粘附因子的双重修饰反义核酸创建创新癌症疗法

• 批准号: 21H02984
• 负责人: 小寺 泰弘
• 金额: $ 10.98万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02984/
• 关键词: 胃癌; アンチセンス核酸医薬; Transcriptome解析; コンパニオン診断; PCDHA11; 細胞接着因子

本研究では、細胞接着因子を標的としたアンチセンス核酸医薬による新たな胃癌分子標的治療薬およびコンパニオン診断技術開発を目指して実験を進めている。令和4年度は、以下の進捗を得ている。 メカニズム解明のために、ターゲットバリデーションを進めた。標的分子の機能解析としてアンチセンス核酸によるノックダウン前後でのスフェロイド形成能を比較したところ、ノックダウンにより顕著にスフェロイド形成は阻害された。また、幹細胞性のsurrogateマーカーであるALDH活性はノックダウンにより低下した。どのような細胞内シグナルに干渉することで活性を示しているかを調べるためにPTM Scanで得られたリン酸化状態のデータを解析して候補シグナル系を抽出した。標的分子の生態・恒常性維持における役割を調べるため、WT/ヘテロ/ホモノックアウトマウスを作成した。次年度に胎生死の有無、生態、成長、行動、代謝（血液検査を含む）および生殖を経時的に観察していく。in vitro活性評価も進め、癌種横断的（胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、食道癌、膵癌）な細胞株に対するアンチセンス核酸の細胞増殖阻害活性データを取得した。in vivo活性評価に先だって、in vitro細胞毒性評価とin vivo毒性評価（肝毒性に着目）を行い、配列選抜を進めた。コンパニオン診断開発に向けて、胃癌症例の組織検体を対象に免疫染色法を実施し、標的蛋白の組織中発現解析の条件設定を完了した。

在这项研究中，我们正在进行实验，旨在利用针对细胞粘附因子的反义核酸药物开发一种新的胃癌分子靶向治疗和伴随诊断技术。 2020财年，我们取得了以下进展。 进行目标验证以阐明其机制。作为目标分子的功能分析，我们用反义核酸比较了敲低前后的球体形成能力，发现敲低后球体形成受到显着抑制。此外，ALDH 活性（干性的替代标记）通过敲低而降低。为了找出该蛋白通过干扰什么样的细胞内信号而表现出其活性，我们分析了PTM Scan获得的磷酸化状态数据并提取了候选信号系统。为了研究目标分子在生态和稳态中的作用，我们生成了 WT/异种/同种基因敲除小鼠。在接下来的一年里，我们将随着时间的推移观察胚胎状态、生态、生长、行为、新陈代谢（包括血液测试）和繁殖。我们还进行了体外活性评估，获得了反义核酸对跨癌症类型（胃癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、食道癌和胰腺癌）细胞系的细胞生长抑制活性的数据。在体内活性评价之前，进行体外细胞毒性评价和体内毒性评价（重点是肝毒性），并进行序列选择。为了开发伴随诊断，我们对胃癌病例的组织样本进行了免疫染色，并完成了组织中靶蛋白表达分析的设置条件。