腫瘍微小環境の理解に基づく効果的な治療法の開発

基于了解肿瘤微环境开发有效的治疗方法

• 批准号: 21H02369
• 负责人: 杉浦 喜久弥
• 金额: $ 9.24万
• 依托单位: Osaka Metropolitan University (2022-2023)Osaka Prefecture University (2021)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02369/
• 关键词: 腫瘍微小環境; 繊維芽細胞成長因子2; 腫瘍血管内皮細胞; 腫瘍遺伝子治療; 腫瘍免疫治療; 線維芽細胞成長因子2; 遺伝子治療; 免疫治療; 活性化線維芽細胞

１）がん関連線維芽細胞構成の改変による腫瘍成長の抑制に関する研究では、クローニングした繊維芽細胞成長因子-2（FGF2）を生体内の腫瘍細胞に導入して発現させることを検討した。CT26WT大腸癌株を同系のBALB/cマウスに静脈内投与して肺に腫瘍を形成させたのち、腫瘍細胞に対する選択性の高い遺伝子導入担体を用いて、マウスFgf2遺伝子を挿入したpcDNA3.1発現プラスミドを担癌マウスに静脈内投与した。投与2日後に肺を採取して免疫組織化学によってFGF2の発現を調べたところ、プラスミドのみを投与したコントロールに比べて腫瘍細胞での発現が有意に増加した。一方、正常組織にはFGF2の発現は見られなかった。２）腫瘍血管内皮細胞（TE）の除去による腫瘍成長の抑制に関する研究では、犬のがん治療への応用に向けて、マウスから分離した腫瘍血管内皮細胞（TEC）をin vitroにおいて増殖させることができるかを検討した。1）と同様にCT26WT大腸癌株の腫瘍を形成させたBALB/cマウス肺を採取し、磁気細胞分離法によってCD31陽性細胞分画を得た。この細胞分画について、内皮細胞マーカーのVEGFR2、TECマーカーのTEM8および抗原提示分子のMHCクラスⅠ（MHC Ⅰ）に対する抗体を用いて、フローサイトメトリーでの解析を基にVEGFR2高発現、TEM8陽性、MHC Ⅰ高発現（VEGFR2high TEM8+ MHC Ⅰhigh）細胞をTECとして分離した。この細胞は、これまでTECとして報告されている狭い細胞質を持つ角ばった細胞とマクロファージ様の大型細胞で構成されていた。本細胞をmatrigelまたはvitronectinをコートした培養皿において血管内皮用培地中で培養したところ、20継代以上増殖し、上記マーカーの発現も維持されていることが判明した。

1）研究研究了与癌症相关成纤维细胞构型的修饰有关抑制肿瘤生长的研究，以表明并表达清洁成纤维细胞生长因子-2（FGF2）中的生命体内的肿瘤细胞。 PCDNA3.1在小鼠FGF2基因插入CT26WT结直肠癌库存中插入小鼠FGF2基因的表达，在同一系统中形成肺部肿瘤，然后在肺中形成肿瘤，然后形成肿瘤使用高度选择性的基因引入载体对肿瘤细胞进行静脉内施用。给药后两天，收集肺并通过免疫遗传化学检查FGF2的表达，与仅施用质粒的对照组相比，肿瘤细胞中的表达显着增加。另一方面，正常组织没有看到FGF2的表达。 2）通过去除肿瘤血管（TE）控制肿瘤生长的研究是为了在体外与小鼠分离以应用狗癌治疗，该肿瘤血管内皮细胞（TEC）检查是否可以完成。与1）一样，收集了CT26WT结直肠癌库存肿瘤的BALB/C小鼠肺，并通过磁细胞分离方法获得CD31阳性细胞分裂。关于这种细胞分裂，使用内皮细胞标记物的VEGFR2的抗体，TEC标记物的TEM8和抗原表现分子的MHC I类（MHC II）的抗体，基于流量点的分析的VEGFR2高表达。 MHCⅰ高表达（VEGFR2HIGH TEM8+ MHCⅰ高）细胞分离为TEC。细胞由据报道为TEC的狭窄细胞肿瘤和大细胞（例如巨噬细胞）组成。当将该细胞在涂有基质素或玻璃纤维蛋白涂层的培养皿中的血管内皮介质中培养时，发现上述标记的表达被维持或更多。

项目成果

イヌiPS細胞の安定的かつ効率的なフィーダーフリー培養条件の検討

犬 iPS 细胞稳定高效的无饲养层培养条件检查

• 发表时间: 2022
• 作者: 長倉京哉;塚本雅也;木村和人;杉浦喜久弥;鳩谷普吾
• 通讯作者: 鳩谷普吾

樹状細胞の活性と機能を特異的に増強するアジュバントによる腫瘍免疫治療効果の検討

使用特异性增强树突状细胞活性和功能的佐剂检查肿瘤免疫治疗的效果

• 发表时间: 2022
• 作者: 渡邊駿一;弓場英司;赤澤隆;鳩谷普吾;金城綾二;稲葉俊夫;杉浦喜久や
• 通讯作者: 杉浦喜久や