平滑筋ミオシン変異による家族性大動脈解離の分子機構解明と治療法開発

平滑肌肌球蛋白突变所致家族性主动脉夹层分子机制阐明及治疗进展

• 批准号: 20K22932
• 负责人: 澤城 大悟
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-09-11 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K22932/
• 关键词: 平滑筋ミオシン重鎖; 大動脈平滑筋; 細胞老化; 血管平滑筋; ミオシン重鎖; 大動脈解離; 大動脈瘤

Myh11変異マウスのフェノタイプ解析を目的として平滑筋ミオシンの遺伝子変異（Exon29 del1263K）による家族性大動脈瘤/解離家系を報告し、改良Crispr-Cas9系で同一変異をB57BL/6マウスに導入した。本研究ではまず、変異マウスと野生型マウスの表現型を比較検討を行った。Myh11ミオシンヘテロ変異マウスでは、ヘテロおよびホモマウスではフェニレフリン(Phe)に対する大動脈収縮反応が低下することを明らかにした。現在大動脈の収縮・弛緩機能についてのバイオマーカー、大動脈の組織学的評価、血管壁で発現するRNAの定量的解析、血管平滑筋ミオシンの分子機能など）の解析を進めている。今後は各遺伝子型のマウスで大動脈負荷刺激(アンギオテンシン II, βアミノプロピオニトリル等)を行い、大動脈解離発症モデルを作成することを予定する。また大動脈壁脆弱性等平滑筋機能不全についての基礎的検討としてMyh11変異マウス胎児線維芽細胞を使用し放射線障害・化学障害による細胞老化への反応性相違について検討を行った。p53の発現に関して放射線障害下ではMyh11変異線維芽細胞は初期の遺伝子誘導は高値であるものの48時間以降は野生型に比し減弱する傾向であった。Buslfanによる細胞障害に対しては差異を認めなかった。現在、細胞伸展刺激に対してのFAK等シグナルカスケードの反応性差異をを検討している。

出于对MYH11突变小鼠的表型分析的目的，我们报告了由平滑肌肌球蛋白基因突变（Exon29 del1263k）引起的家族性主动脉瘤/解离家族，并将相同的突变引入了具有改善的CRISPR-Cas9线的B57BL/6小鼠中。在这项研究中，我们首先比较并检查了突变小鼠和野生型小鼠的表型。已经发现，在MYH11肌球蛋白异质化小鼠中，在异性小鼠和HOMO小鼠中降低了对苯肾上腺素（PHE）的主动脉收缩反应。目前，我们正在进行生物标志物的分析，以分析主动脉的收缩和放松，主动脉的组织学评估，对血管壁中表达的RNA的定量分析以及血管平滑肌肌球蛋白的分子功能。将来，我们计划在每种基因型的小鼠中执行主动脉荷载刺激（血管紧张素II，β-氨基离子二依肽等），以创建一种用于开发主动脉夹层的模型。此外，作为对主动脉壁脆弱性平滑肌功能障碍的基础研究，我们使用MYH11突变的小鼠胎儿成纤维细胞来检查由于辐射和化学疾病引起的细胞衰老的响应差异。关于p53的表达，尽管早期基因诱导较高，但与野生型相比，MYH11突变体成纤维细胞往往会减弱。在灌木丛引起的细胞损伤中没有发现差异。我们目前正在研究FAK信号级联对细胞扩展刺激的反应性差异。