Effect of Regorafenib on Proliferation and Differentiation of Human Conjunctiva Fibroblast.

瑞戈非尼对人结膜成纤维细胞增殖和分化的影响。

基本信息

批准号：
20K09816
负责人：
小嶌祥太
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Osaka Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

代表的な緑内障手術である線維柱帯切除術はマイトマイシンC(MMC)などの線維芽細胞増殖抑制薬の併用によって濾過胞と眼圧下降が維持されている。しかし濾過胞菲薄化から濾過胞感染など重篤な術後副作用が問題となっている。われわれはイヌ緑内障手術モデル眼においてマルチキナーゼ阻害薬であるレゴラフェニブ術後点眼によりMMC併用と同等の濾過胞維持効果と眼圧下降が得られ、より虚血や菲薄化の少ない濾過胞が形成されることを示した(Nemoto E, Kojima S, et al. Int J Mol Sci. 2019 Dec 20;21(1):63. doi: 10.3390/ijms21010063. )。次にヒト結膜線維芽細胞(HconFs)を用いて検討を行い、レゴラフェニブによりHConFsの増殖を効果的に抑制するのは2mM付近であることが示された。そしてTGF-β2により増加したαSMA陽性細胞、PCNA陽性細胞、 vimentin 陽性細胞は2mMのレゴラフェニブ投与により有意に抑制された。すなわちレゴラフェニブは線維芽細胞の増殖と筋線維芽細胞への形質転換を抑制する可能性が示唆された。さらに、HconFsをレゴラフェニブ2mMを処置した群と対照群とに分けてTGF-β2を加え、 Smad2, p-Smad2, Smad3, p-Smad3, p38, p-p38, Akt, p-Akt, Erk, p-Erk のような細胞増殖に関連するサイトカインの発現を検討した。TGF-β反応後、リン酸化された各因子の発現が抑制されていた。特に5分以内の反応ではSmad経路よりもno-Smad経路の因子がより抑制されることが示されている。さらに scratch assay を用いてHconFsをレゴラフェニブ処置することによって細胞の増殖だけでなく遊走も抑制されることが示された。

小梁切除术是一种典型的青光眼手术，通过联合使用丝裂霉素 C (MMC) 等成纤维细胞增殖抑制剂来维持滤过泡并降低眼压。然而，术后滤过泡变薄、滤过泡感染等严重副作用已成为问题。在犬青光眼手术模型眼中，我们发现术后滴眼液瑞戈非尼（一种多激酶抑制剂）对于维持滤过泡具有与联合MMC相同的降低眼压的效果，并形成滤过泡减少缺血和变薄（Nemoto E, Kojima S, et al. Int J Mol Sci. 2019 Dec 20;21(1):63.doi: 10.3390/ijms21010063）。接下来，我们使用人结膜成纤维细胞（HconFs）进行了研究，结果表明瑞戈非尼在 2mM 左右可有效抑制 HConFs 的增殖。通过给予2mM瑞戈非尼，TGF-β2增加的αSMA阳性细胞、PCNA阳性细胞和波形蛋白阳性细胞被显着抑制。换句话说，有人认为瑞戈非尼可能抑制成纤维细胞增殖和肌成纤维细胞转化。此外，将HconF分为用瑞戈非尼2mM处理的组和对照组，并添加TGF-β2 -我们研究了与细胞增殖相关的细胞因子的表达，例如Erk。 TGF-β反应后，各磷酸化因子的表达受到抑制。特别是，已经表明，在 5 分钟内的反应中，no-Smad 途径因子比 Smad 途径受到更多抑制。此外，使用划痕试验表明，用瑞戈非尼处理 HconF 不仅可以抑制细胞增殖，还可以抑制细胞迁移。