麻酔関連薬剤の血管内皮グリコカリクスに対する影響および保護物質の検討

麻醉相关药物对血管内皮糖萼的影响及保护物质检测

• 批准号: 20K09252
• 负责人: 西和田 忠
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K09252/
• 关键词: 口腔癌細胞株; セボフルラン; 細胞増殖; グリコカリクス; アグリン; 癌細胞; HepG2; 血管内皮細胞; 全身麻酔薬

MTT assayにてセボフルラン2% 6時間暴露が、口腔癌細胞株HSC-3のviabilityを低下させること、LDH assayにてセボフルラン2% 6時間暴露が、HSC-3に傷害的に作用することが確認された。また、HSC-3のAgrin濃度の測定を行ったところ、セボフルラン2%　6時間暴露によってAgrin濃度の低下が確認された。セボフルランがHSC-3を抑制するメカニズムにAgrinが関与している可能性を考え、次にコントロール群とセボフルラン2%群間のAgrin濃度の差を計算し、その差に当たるAgrinをRecombinant Human Agrin Proteinを用いて外的に暴露し同様の実験を行った。しかし、セボフルラン2% 6時間暴露によるHSC-3の抑制効果は、Agrin存在下に再現性を伴う結果が得られなかった。今後、セボフルラン2%　6時間暴露によるHSC-3に対する影響について、コロニー形成法による細胞増殖能の評価を行う。さらにフローサイトメトリーによってもBrdUを用いて細胞周期を含めた細胞増殖能を検討し、どの周期で細胞増殖が停止しているかを詳細に調査する。またアポトーシスについてもフローサイトメトリーで調査する。また、セボフルラン2% 6時間暴露がHSC-3のviability低下、細胞傷害性増加に与える作用のメカニズムとして、Agrin以外の可能性についても検討する。

MTT试验证实暴露于2%七氟醚6小时可降低口腔癌细胞系HSC-3的活力，LDH试验证实暴露于2%七氟醚6小时对HSC-3有破坏作用。此外，当测量HSC-3的Agrin浓度时，证实了通过暴露于2％七氟烷6小时，Agrin浓度降低。考虑到Agrin可能参与了七氟醚抑制HSC-3的机制，我们接下来计算了对照组和七氟醚2%组之间Agrin浓度的差异，并将该差异对应的Agrin转换为重组人Agrin蛋白使用外部曝光进行了类似的实验。然而，在 Agrin 存在的情况下，暴露于 2% 七氟醚 6 小时的 HSC-3 抑制效果无法重现。今后，我们将通过集落形成法评价细胞增殖能力，评价2%七氟烷暴露6小时对HSC-3的影响。此外，我们将使用BrdU通过流式细胞术检查细胞增殖能力，包括细胞周期，并详细研究细胞增殖在哪个周期停止。还将使用流式细胞术研究细胞凋亡。我们还将研究 Agrin 以外的可能性，即暴露于 2% 七氟烷 6 小时会降低 HSC-3 活力并增加细胞毒性。