Functional analysis of salt-inducible kinase and steroid-producing tissues by targeted proteomics and mass spectrometry

通过靶向蛋白质组学和质谱法对盐诱导激酶和类固醇产生组织进行功能分析

基本信息

批准号：
20K08867
负责人：
秦野修
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

塩誘導キナーゼ（Salt-Inducible Kinases: SIK1,2,3)はAMPKファミリーに属し、SIK1,2,3 の各欠損/変異マウスはステロイドホルモン産生酵素の発現異常、生殖異常、代謝異常、軟骨形成異常、睡眠異常、虚血性疾患などの多彩な異常を呈する。これら多様な表現型異常に関与する SIK1,2,3 の機能発現機構を明らかにする目的で、SIK1,2,3 に結合するタンパク質について、ヒト転写因子群、シグナル伝達関連分子群等から、in vitro での網羅的なスクリーニングを行った。ヒトSIK1,2,3 各種の全長タンパク質をコムギ胚芽無細胞系で合成し、ビオチン化を行った後、愛媛大学プロテオサイエンスセンターが構築した約8,300種のヒトタンパク質アレイ（転写因子等のDNA結合タンパク質:1,334種、プロテインキナーゼ群:483種、epigenetic 関連因子:861種などを機能種別にほぼ網羅的に含む）から AlphaScreen 法を用いて、SIK1,2,3 各種の全長タンパク質との結合実験を行ない、SIK1,2,3 各種に強く結合するヒトタンパク質を、各々約20種同定した。又、これらの Alphascreen 結合実験は、in vitro で合成されたタンパク質同士の結合スクリーニングであるが、より生体（in vivo）に近い培養細胞中での、SIK1,2,3 の相互作用タンパク質を同定するために、SIK1,2,3 の各全長タンパク質に、最近、開発された近接依存性ビオチン化酵素(AirID)を連結した発現プラスミドを構築し、培養細胞条件下における塩誘導キナーゼの結合/相互作用タンパク質の同定の準備を行っている。

盐诱导激酶（SIK1,2,3）属于AMPK家族，SIK1,2,3缺陷/突变的小鼠存在类固醇激素产生酶的异常表达、生殖异常、代谢异常和软骨异常。睡眠异常、缺血性疾病等多种异常。为了阐明参与这些各种表型异常的SIK1、2和3的功能表达机制，我们研究了来自人类转录因子、信号转导相关分子等的与SIK1、2和3结合的蛋白质。进行了全面的体外筛选。人类SIK1,2,3在小麦胚芽无细胞系统中合成了各种全长蛋白质，并在生物素化后，由爱媛大学Proteoscience构建了约8,300种人类蛋白质（转录因子等DNA结合蛋白质）的阵列中心。使用这种方法，我们对 SIK1、2 和 3 的各种全长蛋白进行了结合实验，并鉴定了大约 20 个与每种类型的 SIK1、2 和 3 强烈结合的人类蛋白。此外，这些Alphascreen结合实验正在筛选体外合成的蛋白质之间的结合，但它们更类似于体内，以鉴定培养细胞中SIK1、2和3的相互作用蛋白质。我们构建了一个表达质粒，其中最近开发的邻近依赖性生物素化酶（AirID）与每个全长蛋白连接，并准备用于在培养细胞条件下鉴定盐诱导激酶结合/相互作用蛋白。

项目成果

期刊论文数量（9）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Salt Inducible Kinases Are Critical Determinants of Female Fertility.

盐诱导激酶是女性生育力的关键决定因素。

DOI：
10.1210/endocr/bqaa069
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
4.8
作者：
Armouti M; Winston N; Hatano O; Hobeika E; Hirshfeld
通讯作者：
Hirshfeld

CREB coactivator CRTC2 plays a crucial role in endothelial function.

CREB 共激活因子 CRTC2 在内皮功能中发挥着至关重要的作用。

DOI：
10.1523/jneurosci.0407-20.2020
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
5.3
作者：
Kanki H; Sasaki T; Matsumura S; Kawano T; Todo K; Okazaki S; Nishiyama K; Takemori H; Mochizuki H.
通讯作者：
Mochizuki H.

Evaluation of Cell-Free Synthesized Human Channel Proteins for In Vitro Channel Research

用于体外通道研究的无细胞合成人通道蛋白的评估