シェーグレン症候群唾液腺におけるTLR7シグナル活性および機能解析

干燥综合征唾液腺中TLR7信号活性及功能分析

基本信息

批准号：
20K17445
负责人：
清水俊匡
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17445/
关键词：
シェーグレン症候群 TLR7 Toll-like receptor 7 唾液腺

项目摘要

シェーグレン症候群(SS)の唾液腺上皮細胞に対してToll-like receptor(TLR)7のリガンド刺激で、I型インターフェロン活性シグナルに加え、MHC class Iの発現増強、またシェーグレン症候群の自己抗原の一つであるRo52の発現増強をウェスタンブロットで確認した。また免疫細胞染色でも唾液腺上皮細胞中で同様にこれらの発現増強を認めた。また実際のSS症例の唾液腺組織の導管上皮においても発現増強を認めた。抗原提示細胞に発現するMHC class Iを介して抗原ペプチドはT細胞等の免疫細胞に抗原提示され、免疫応答が活性化される。上記結果よりTLR7シグナル活性が自己抗原の発現増強を引き起こし、加えて抗原提示による免疫活性を引き起こすことを考慮し、検討をすすめた。TLR7刺激で抗原提示をすすめるか確認するため、抗原ペプチドがMHC class Iと結合する際に必要なMHC classI peptide-loading complex(PLC)の形成を認めるかどうかを確認した。その結果、唾液腺上皮細胞において、TLR7刺激後にPLCの発現増強を認めた。SSの唾液腺上皮細胞においてTLR7刺激後においてSSにみられる自己抗体の一つである抗SS-A/Ro抗体の対応抗原であるRo52の発現増強を認めた。このRo52は唾液腺上皮細胞中MHC class Iで免疫沈降して得られた蛋白ライセート中でもTLR7刺激後発現増強していた。唾液腺上皮細胞中のTLR7をCRISPR-Cas9などでノックアウトした場合これらのシグナルが抑制されるか解析をすすめている。

除了I型干扰素活性信号外，MHC I类表达增强以及RO52的表达增加，RO52是Sjogren综合征的一种自动抗原，通过Tollivary syndrome syndrome综合征的Toll-like受体（TLR）7的Western Blotting证实了Sjogren综合征的一种自动抗体。此外，免疫细胞染色还显示出在唾液腺上皮细胞中的增强表达。另外，在实际的SS情况下，在唾液腺组织的导管上皮中也观察到了增加的表达。通过在抗原呈递细胞上表达的MHC I类将抗原肽呈现给免疫细胞，例如T细胞，并激活免疫反应。基于上述结果，我们建议TLR7信号活性导致自身抗原的表达增强，并通过抗原表现诱导免疫活性。为了确认是否通过TLR7刺激促进了抗原呈递，我们确认抗原肽是否会形成MHC分类肽载体复合物（PLC），这对于与MHC类I结合是必要的。因此，PLC的表达在TLR7刺激后增强了TLR7刺激液化性粘液性腺体上皮细胞。在SS的唾液腺上皮细胞中，抗SS-A/RO抗体的相应抗原的表达在TLR7刺激后增强了SS中的自身抗体之一。 TLR7刺激后，即使在唾液腺上皮细胞中使用MHC I类免疫沉淀获得的蛋白质裂解物中，这种RO52也得到了增强。我们目前建议在唾液腺中的TLR7上皮细胞是否被CRISPR-CAS9拆除，还是确定这些信号是否被抑制。