エリスロポエチン受容体を介した急性腎障害の新規治療法の開発

开发促红细胞生成素受体治疗急性肾损伤新方法

基本信息

批准号：
20K17268
负责人：
中山陽介
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K17268/
关键词：
SDMA ADMA AKI NO CKD DDAH Erythropoietin Epo receptor

项目摘要

本研究では急性腎障害時のADMA蓄積がエリスロポエチン受容体低下を介して虚血による腎障害を引き起こすと仮説をたて、エリスロポエチン受容体を標的とした腎障害のマーカー、治療法の開発を目指す。初年度はADMAの構造異性体であるSDMA（HPLC）が初期の腎不全予測の有用なマーカーになることを見出した。治療法の確立と平行し予測マーカーの確立を目指し、SDMAのELISA作成を行った。方法：抗原(SDMA-linker-KLH)を炭酸バッファー(pH9.6) を用いて 5μg/mL に調製し、50μL/wellでプレートに固相化。1% skim/PBS を用いてブロッキング後、抗体価測定。血清希釈液 50μL をプレートに加え、室温 1 時間で反応。次に HRP 標識 anti-MouseIgG(Jackson)10,000 倍希釈液 50μL を加え室温 1 時間反応。発色基質 TMB(ナカライ)50μL 加え、室温 15 分間発色後、1NH2SO4 で停止後、450nm で OD 測定。Day35 の中間採血血清では、前回免疫個体(SM646-648)に比べ抗体価上昇傾向が確認されたため、予定通り追加投与 2 回実施後、Day63 の中間採血血清と共に再度抗体価測定を実施した。結果：Day63 で若干の抗体価上昇が見られるものの、血清希釈倍率 1/200 において、OD が>2.0となっておらず、SDMA に対する抗原認識が弱いことが推測された。linker-BSAにて免疫に変更しても抗体価上昇はKLH時と同様であった。

在这项研究中，我们假设急性肾损伤期间 ADMA 的积累通过促红细胞生成素受体的减少导致缺血引起的肾损伤，并旨在开发针对促红细胞生成素受体的肾损伤标记物和治疗方法。第一年，我们发现 SDMA (HPLC)（ADMA 的结构异构体）是预测早期肾衰竭的有用标志物。在建立治疗方法的同时，我们创建了 SDMA ELISA，旨在建立预测标记。方法：使用碳酸盐缓冲液（pH 9.6）将抗原（SDMA-linker-KLH）制备成 5 μg/mL，并以 50 μL/孔固定在板上。用 1% 脱脂/PBS 封闭后，测量抗体滴度。将 50 μL 稀释血清加入板中，室温孵育 1 小时。接下来，加入 50 μL HRP 标记的抗小鼠 IgG (Jackson) 10,000 倍稀释液，并在室温下反应 1 小时。加入50 μL显色底物TMB（Nacalai），室温显色15分钟，用1NH2SO4终止，并在450 nm处测量OD。在第35天收集的中间血清中，与先前免疫的动物（SM646-648）相比，确认了抗体效价增加的趋势，因此在按计划施用两次额外剂量后，再次测量抗体效价以及第63天采集的中间血清。结果：虽然在第63天观察到抗体滴度略有增加，但在1/200的血清稀释度下，OD不>2.0，表明SDMA的抗原识别较弱。即使将免疫改为连接体-BSA，抗体滴度的增加也与KLH期间相似。