急性骨髄性白血病に対するCLL-1特異的キメラ抗原受容体T細胞療法の改良

CLL-1特异性嵌合抗原受体T细胞治疗急性髓系白血病的改进

• 批准号: 20K16395
• 负责人: 田代 晴子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16395/
• 关键词: CAR-T; AML; CLL-1; 急性骨髄性白血病

急性骨髄性白血病（AML）に対する、CAR-T(chimeric antigen receptor)細胞療法を開発中である。AMLに高発現するCLL-1を標的としたCAR-Tである、CLL-1 CAR-T細胞の抗腫瘍効果を増強させるため、恒常的IL-7シグナルを起こすコンストラクトC7Rとの共発現を行っている。前年度までにin vitroでの、C7Rを共発現させたCLL-1 CAR-T細胞の抗腫瘍効果の増強を確認できたため、in vivoでの抗腫瘍効果増強の確認に取り組んだ。過去の実験結果から、CLL-1CAR-T単独では、NSGマウスに50,000個のHL60を投与しその翌日に0.6MLNのT細胞を投与した際に、長期生存が確認されたため、CLL-1 CAR-T単独ではコントロールできないT細胞のdoseを投与する必要があったため、およそ10分の１の0.05MLNのT細胞の投与を行った。しかしこの量では腫瘍のコントロールはできなかった。そのためtitrationを行うこととしたが、in vivo　イメージング用のIVISの故障で、実験の中断を余儀なくされた。現在tirationから再開しているところである。また、CLL-1CARとC7Rをそれぞれ別のプラスミドベクターを用いて遺伝子導入していたが、1つのプラスミドにクローニングすることに成功した。単一プラスミドを用いた場合ではおよそ60-80%の発現が確認でき、恒常的なｐSTAT5の発現が確認できている。

我们目前正在开发针对急性髓系白血病（AML）的 CAR-T（嵌合抗原受体）细胞疗法。为了增强 CLL-1 CAR-T 细胞的抗肿瘤效果，CLL-1 CAR-T 细胞是一种针对 AML 中高表达的 CLL-1 的 CAR-T，我们将其与构建体 C7R 共表达，C7R 会引起组成型 IL-7 信号。 是。到前一年，我们已经在体外证实了共表达C7R的CLL-1 CAR-T细胞增强的抗肿瘤作用，因此我们致力于在体内证实增强的抗肿瘤作用。从过去的实验结果来看，当给 NSG 小鼠施用 50,000 个 HL60 并在第二天施用 0.6 MLN T 细胞时，单独的 CLL-1 CAR-T 显示出长期存活，因为需要施用一定剂量的 T 细胞。由于不能单独用 T 来控制，我们以大约 1/10 剂量（0.05 MLN）施用 T 细胞。然而，这个量并不能控制肿瘤。因此，我们决定进行滴定，但由于体内成像的IVIS故障，我们被迫暂停实验。我们目前正在从疲倦中重新开始。此外，CLL-1CAR和C7R之前是使用单独的质粒载体引入的，但它们已成功克隆到单个质粒中。当使用单一质粒时，确认了大约60-80%的表达，并且确认了恒定的pSTAT5表达。

项目成果

Combining a constitutively active IL-7 receptor with CLL-1 CAR T-cells for treatment of acute myeloid leukemia

将组成型活性 IL-7 受体与 CLL-1 CAR T 细胞相结合，治疗急性髓系白血病

• 发表时间: 2022
• 作者: Haruko Tashiro;Thomas Shum;Ryosuke Shirasaki;Bilal Omer;Cliona M. Rooney;Stephen Gottschalk;Malcolm K. Brenner.
• 通讯作者: Malcolm K. Brenner.