老化Ｔ細胞の機能解析およびその正常化方法の探索

衰老 T 细胞的功能分析并寻找使其正常化的方法

• 批准号: 20K16291
• 负责人: 永井 直
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16291/
• 关键词: Ｔ細胞; 疲弊; 老化; エピジェネティクス; 転写制御; がん

免疫系の中心を担うＴ細胞は、加齢や疾患に伴って老化（senescence）あるいは疲弊（exhaustion）といった機能不全状態に陥ることが知られている。本研究は、Ｔ細胞の機能不全が誘導されるエピジェネティックなメカニズムの解明を目指すものである。昨年度、シングルセルRNA-seqによって機能不全状態のＣＤ４陽性Ｔ細胞集団を同定し、この細胞集団を規定する細胞表面分子のリストアップを行った。リストアップされた細胞表面分子をもとに、フローサイトメトリーでこの細胞集団を特定し、解析を進めることを試みたが、濾胞ヘルパーＴ細胞との区別ができなかったことで解析が難航した。他方、並列して進めていたin vitroにおける老化Ｔ細胞の誘導系についても、既報の論文で報告されているような明確なフェノタイプは得られなかった。そこで、実験系や解析対象が良く確立されている、がんにおけるＣＤ８陽性T細胞の疲弊にフォーカスを移し、疲弊に関わる新規遺伝子を同定する解析を始めた。出版済みの5つのRNA-seqデータを解析し、疲弊によって発現が上昇あるいは低下する遺伝子をリストアップした。次に、リストアップされた遺伝子をノックダウン（疲弊で発現が上昇する遺伝子）あるいは過剰発現（疲弊で発現が低下する遺伝子）させた際に、疲弊化がブロックされるかをin vivoスクリーニングにより解析した。スクリーニングには、B16-OVA担がんマウスにOT-I CD8陽性T細胞を移入することによって疲弊を誘導するモデルを用い、OT-I CD8陽性T細胞を移入する前に、in vitroにおいて候補遺伝子の過剰発現あるいはノックダウンを行った。２周のスクリーニングを経て、疲弊により発現が低下し、過剰発現によって疲弊がブロックされる遺伝子が１つヒットした。

众所周知，发挥免疫系统心脏的T细胞会落入功能失调的状态，例如由于衰老和疾病而导致的衰老或精疲力尽。这项研究旨在阐明诱导T细胞功能障碍的表观遗传机制。去年，通过单细胞RNA-seq鉴定了功能失调的CD4阳性T细胞，并制定了定义该细胞群的细胞表面分子列表。我们尝试使用基于列出的细胞表面分子的流式细胞仪来鉴定该细胞群，并进行分析，但是很难进行分析，因为它无法将其与滤泡辅助T细胞区分开。另一方面，并​​联在体外的衰老T细胞的诱导系统未获得清晰的表型，如先前报道的论文所报道。因此，我们已经开始分析对癌症中CD8阳性T细胞精疲力尽的重点，在癌症中，实验系统和分析靶标的建立良好，并确定涉及精疲力尽的新基因。分析了五个已发表的RNA-seq数据，并列出了由于精疲力尽而增加或降低的表达的基因。接下来，当将列出的基因撞倒时（由于疲惫而表达增加的基因）或过表达（由于疲惫而表达降低的基因）时，体内筛查会阻塞疲劳。为了进行筛查，使用了通过将OT-I CD8阳性T细胞注入B16-OVA癌症小鼠中的模型，并在转移OT-I CD8阳性T细胞之前过表达或击倒候选基因。经过两轮筛查后，击中了一个基因，由于精疲力尽而减少，并且过表达阻塞了疲惫。