皮膚障害発現機序の解明によるボリコナゾールの至適投与設計法の開発

通过阐明皮肤损伤发展机制开发伏立康唑最佳剂量设计方法

• 批准号: 20K16041
• 负责人: 山田 尚広
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K16041/
• 关键词: ボリコナゾール; 皮膚障害; P-VNO; PD-VNO; 酸化ストレスマーカー; Nオキシド体; ヒドロキシ体; 光産生物

令和4年度は、前年度までに行っていたケラチノサイトを用いたVRCZ、VNO、P-VNOおよびPD-VNO添加による細胞障害性についての評価の検討を進めた。前年度までの課題としては、細胞実験において設定した条件で、P-VNOとPD-VNOの細胞障害性が真に同程度か否か判別できていないことが課題であった。課題解決のため、前回実験で得られた各条件下の残液をLC-MS/MSにより測定を行うこととした。結果としては、P-VNOを想定した条件下の残液中にはPD-VNOが含まれていることが確認され、細胞実験の条件見直しの必要性が考えられた。条件は現在検討中であるが、以下の条件にて再試験を行う予定である。正常ヒト表皮角化細胞(NHEKs) を、 HuMedia-KG2 (KG2) 培地を用いて96穴マイクロプレートに播種。NHEKsは濃度既知のVNOを含有するKB2培地に交換した後、UVB照射、熱処理の条件を設定し、P-VNOおよびPD-VNOの産生を想定した場合分けを行う。この熱処理条件設定の際に、前回までは熱処理しない群は常温下の条件であったが、これを氷冷上とすることによりP-VNOからPD-VNOへの変換を制御する。その後、それぞれに8J/cm2のUVAを曝露。なお、UVA未曝露群は、アルミ箔にてカバーすることで UVAを完全に遮蔽。UVA曝露後、33μg/mL neutral red (NR) 含有 KB2培地にて2時間培養した後、30%エタノール含有0.1 mol/L HCl溶液を用いてNRを抽出。細胞数の指標は、抽出液の吸光度を測定し、試験試料未処理細胞 (N.C.) を100とした場合の相対値で表す。

在2022年，我们对使用角质形成细胞添加了VRCZ，VNO，P-VNO和PD-VNO对细胞毒性的评估进行了研究，直到上一年才进行。直到上一年的挑战是，在细胞实验中设定的条件下，不可能确定P-VNO和PD-VNO的细胞毒性是否真的相同。为了解决该问题，使用LC-MS/MS测量了在各种条件下在先前实验中获得的残留液体。结果，已经证实，在假定为P-VNO的条件下，在残留溶液中包含PD-VNO，并且认为有必要审查细胞实验的条件。目前正在考虑这些条件，但该测试将在以下条件下进行。使用HUMEDIA-KG2（KG2）培养基，将正常的人表皮角质形成细胞（NHEKS）播种在96孔微孔板中。在用含有已知浓度的VNO浓度的KB2培养基代替NHEKS之后，设置了UVB辐射和热处理条件，并将NHEKS分为两类，假设P-VNO和PD-VNO的产生已就位。在设置热处理条件时，直到上一次不进行热处理的组才在室温下，但是通过在冰冷上使用它，控制了从p-vno到pd-vno的转换。然后将每个暴露于UVA的8J/CM2。此外，无UVA组被铝箔覆盖以完全屏蔽UVA。暴露于UVA后，将混合物在含有33μg/ml中性红色（NR）的KB2培养基中培养2小时，然后使用含有30％乙醇的0.1 mol/L HCl溶液提取NR。当测量提取物的吸光度和未处理细胞（N.C.）100时，细胞计数指数表示为相对值。