光バイオプシーとリキッドバイオプシーを用いた口腔癌の早期診断システムの開発

开发利用光学活检和液体活检的口腔癌早期诊断系统

• 批准号: 21K10101
• 负责人: 松末 友美子
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K10101/
• 关键词: 口腔癌; ラマン分光法; リキッドバイオプシー; 早期診断; ラット舌発癌モデル; 光バイオプシー

本研究の目的は、低侵襲検査である光バイオプシー技術であるラマン分光法とmiRNAをマーカーとするリキッドのバイオプシー技術を用いて、ラット舌癌モデルの癌発生過程に生じる病変の分子組成および分子構造をin situにて解析し、病変の進行にともなう変化を定量的に評価し、病理組織学的、免疫組織化学的変化との関連について明らかにすることである。本研究の成果は、ヒト口腔癌を低侵襲で早期に発見することができる高感度ラマン分光イメージングシステムの開発やリキッドバイオプシーを用いた強た新たな診断技術の応用が期待される。4-nitroquinoline 1-oxide （4-NQO）を用いたラット舌発癌モデルを作製し、舌扁平上皮に、過形成、異形成を経て扁平上皮癌を発生させた。まずは早期癌発生までの各過程における、肉眼的変化を観察した。各過程における病理組織学的変化および免疫組織学的変化を観察するために、HE染色および免疫染色（p53、Ki63、CK13，CK17）を行った。優位性変化が認められたKi63およびCK17の判定基準を用いて、病理組織学的および免疫組織化学的評価を行った。ラット舌発癌モデルの舌粘膜の変化は、ラマン分光法によるハイパースペクトルイメージングデータにおいてDNAタンパク変動を反映していた。これらの変化は、病理組織学的および免疫組織化学的評価と一定の相関を認めた。リキッドバイオプシーではラット舌がんモデルの300μLの凍結血清サンプルから、液体サンプルキットの3D-GeneR NA抽出試薬を用いて総RNAを抽出する予定であったが、試薬がラットには対応しておらず、別の抽出試薬を検討した。また、凍結血清サンプルではなく、パラフィン包埋切片を用いて、包括的な総miRNA発現の解析している。がん発生段階で特異的なバイオマーカーの検索と検証を行う。

本研究的目的是利用拉曼光谱、光学活检技术（一种微创测试）和液体活检技术，研究大鼠舌癌模型中癌症发展过程中发生的病变的分子组成和分子结构。 miRNA作为标记物，目的是对病变进行原位分析，定量评估病变进展过程中的变化，并阐明其与组织病理学和免疫组化变化的关系。这项研究的结果预计将导致开发出一种高灵敏度拉曼光谱成像系统，该系统可以在早期阶段以最小的侵入性检测人类口腔癌，并应用液体活检强大的新诊断技术。我们使用4-硝基喹啉1-氧化物（4-NQO）创建了大鼠舌癌模型，并通过增生和不典型增生在舌鳞状上皮中形成鳞状细胞癌。首先，我们观察了直到早期癌症发展的每个过程中的宏观变化。进行HE染色和免疫染色（p53、Ki63、CK13、CK17）观察各过程的组织病理学和免疫组织学变化。使用 Ki63 和 CK17 的标准进行组织病理学和免疫组织化学评估，其中观察到显着变化。大鼠舌癌模型中舌粘膜的变化反映了使用拉曼光谱的高光谱成像数据中的 DNA 蛋白波动。发现这些变化与组织病理学和免疫组化评估有一定的相关性。在液体活检中，计划使用液体样本试剂盒中的3D-GeneR NA提取试剂从大鼠舌癌模型的300μL冷冻血清样本中提取总RNA，但该试剂与大鼠不兼容，进行了研究。不同的提取试剂。我们还使用石蜡包埋切片而不是冷冻血清样本来综合分析总 miRNA 表达。搜索并验证癌症发展阶段的特定生物标志物。

项目成果

Raman study for development of a diagnostic method of tongue cancer

开发舌癌诊断方法的拉曼研究

• 发表时间: 2023
• 作者: 松吉ひろ子;松末友美子;佐藤英俊
• 通讯作者: 佐藤英俊

Raman study for development of a diagnostic method of tongue cancer

开发舌癌诊断方法的拉曼研究

• 发表时间: 2023
• 作者: 松吉ひろ子;松末友美子;佐藤英俊
• 通讯作者: 佐藤英俊