歯髄におけるGCaseの核移行に着目した新規創傷治癒因子の同定

鉴定一种新型伤口愈合因子，重点关注牙髓中 GCase 的核转位

基本信息

批准号：
21K09882
负责人：
室町幸一郎
金额：
$ 2万
依托单位：
Kanagawa Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09882/
关键词：
象牙質・歯髄複合体 BMP-1 α2,6-sia GCase 歯学

项目摘要

本研究は、齲蝕にさらされた象牙質・歯髄複合体の創傷治癒におけるプロテアーゼを起点とした機序を解明することで、歯髄保存療法へ応用可能な新規標的分子の同定と機能解析を行い創薬への展開を目的としている。これまでの研究から、齲蝕歯の象牙芽細胞様細胞および修復象牙質において発現が亢進するbone morphogenetic protein (BMP)-1がglucosylceramidase (GCase)を標的とすることを明らかにしている。前年度はヒト歯髄培養細胞（hDPCs）においてGCaseがBMP-1によってlysosomeではなく核へ集積し、特にGCaseは核膜のみならず核内へも集積することを明らかにした。加えて、BMP-1によって細胞質画分のGCase活性の増減は認めない一方で、核画分のGCase活性が増加することを明らかにした。続いて本年度はchromatin immunoprecipitation (ChiP)-seqによる新規GCase標的遺伝子の同定を計画していたが、現在も研究を遂行中である。一方で、当初の予定にはなかったものの、前年度から遂行していたRNA干渉の条件が確立した。すなわち、hDPCsにおいてsiRNAによるGCaseのノックダウン系が確立したためRNA-seqによって解析したところ、BMP-1-GCaseはhDPCsにおいてDNA replicationなどに関与する複数の遺伝子の発現を制御することを明らかにした。

这项研究旨在通过阐明暴露于龋齿的牙本质-牙髓复合物中基于蛋白酶的伤口愈合机制来识别和功能分析可应用于牙髓保存治疗的新靶分子，目的是将其开发为药物。先前的研究表明，在成牙本质细胞样细胞和龋齿修复牙本质中高表达的骨形态发生蛋白（BMP）-1以葡萄糖基神经酰胺酶（GCase）为目标。去年，我们发现，在培养的人牙髓细胞（hDPC）中，GCase通过BMP-1而不是在溶酶体中积累在细胞核中，并且特别是GCase不仅在核膜中积累，而且在细胞核中也积累。核。此外，我们发现BMP-1不会增加或减少细胞质部分中的GCase活性，但会增加细胞核部分中的GCase活性。接下来，今年我们计划通过染色质免疫沉淀（ChiP）-seq来鉴定新的GCase靶基因，并且这项研究仍在进行中。另一方面，虽然不在原计划之内，但从前一年开始进行的RNA干扰的条件已经成立。换句话说，在hDPC中建立了siRNA介导的GCase敲低系统，并且RNA-seq分析表明BMP-1-GCase控制hDPC中参与DNA复制的多个基因的表达。