眼圧日内変動に対するメラトニン系の役割の解明

阐明褪黑激素系统对眼压昼夜波动的作用

• 批准号: 21K09739
• 负责人: 東出 朋巳
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09739/
• 关键词: メラトニン; Aanat; Hiomt; マウス; 網膜; 松果体; 眼圧; 日内変動; 遺伝子多型; 時計遺伝子

1) メラトニン産生マウスの作成：B6J.MSM-Aanat<MSM>とB6J.MSM-Hiomt<MSM>を交配させ、F1 （Aanat(+/-);Hiomt(+/-)）を42匹作成した。F1同士の交配により得られたF2の88匹のうちAanat(+/+);Hiomt(+/+)1匹、Aanat(-/-);Hiomt(-/-)3匹が得られた。F2同士の交配により得られたF3の99匹のうちAanat(+/+);Hiomt(+/+)14匹、Aanat(-/-);Hiomt(-/-)9匹がえられた。2) 眼球と松果体の組織切片の作成：F1 Aanat(+/-);Hiomt(+/-)の眼球の凍結切片、松果体のパラフィン切片を作成し、ＨＥ染色にて組織構造を確認できた。3) マウス用OCTによる眼底写真撮影と網膜厚測定：マウス用OCT（MicronⅣ、Phoenix社）を用いてF1（Aanat(+/-);Hiomt(+/-)）において眼底写真撮影と網膜厚測定を行うことができた。4) ANATとHIOMTの発現の確認：B6J.MSM-Aanat<MSM>とB6J.MSM-Hiomt<MSM>の網膜と松果体におけるAANATとHIOMTの発現をWesternBlottingにて確認した。5)メラトニンの定量：網膜、松果体、血液中のメラトニンを定量するために、LC-MS/MSによる測定法の確立を試みた（金沢大学疾患モデル総合研究センター　研究基盤支援施設　西内巧准教授と共同研究）。メラトニン試薬を用いて10ppb-10ppt付近の標準品の分析データを作成することができた。

1)产生褪黑激素的小鼠的创建：将B6J.MSM-Aanat<MSM>和B6J.MSM-Hiomt<MSM>杂交以创建42只F1(Aanat(+/-)；Hiomt(+/-))小鼠。 F1动物交配获得的88只F2小鼠中，获得1只Aanat(+/+)；Hiomt(+/+)和3只Aanat(-/-)；Hiomt(-/-)。在通过F2之间交配获得的99个F3中，获得了14个Aanat(+/+)；Hiomt(+/+)和9个Aanat(-/-)；Hiomt(-/-)。 2）眼球和松果体组织切片的制作：制作F1 Aanat（+/-）眼球冰冻切片和松果体石蜡切片，并检查组织结构。 HE染色我能够确认。 3) 使用OCT对小鼠进行眼底摄影和视网膜厚度测量：使用OCT对小鼠（Micron IV，Phoenix）进行F1（Aanat（+/-）；Hiomt（+/-））的眼​​底摄影和视网膜厚度测量我能够做这个。 4)ANAT和HIOMT表达的确认：通过Western Blotting证实B6J.MSM-Aanat<MSM>和B6J.MSM-Hiomt<MSM>视网膜和松果体中AANAT和HIOMT的表达。 5) 褪黑激素的定量：为了定量视网膜、松果体和血液中的褪黑激素，我们尝试建立使用 LC-MS/MS 的测量方法（Takumi Nishiuchi，研究基础设施支持设施，疾病模型中心，金泽大学）与副教授合作研究）。使用褪黑激素试剂，我们能够为标准产品创建大约 10ppb-10ppt 的分析数据。