シスプラチン難聴予防薬剤の臨床応用に向けた内耳障害予防と抗腫瘍効果の比較検討

预防听力损失药物顺铂临床应用预防内耳疾病及抗肿瘤作用的比较研究

• 批准号: 21K09586
• 负责人: 荒井 康裕
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09586/
• 关键词: コルチ器; 器管培養; confocal microscope; 免疫染色; 内耳; シスプラチン; 器管培養コルチ器; シスプラチン難聴; 内耳障害; 内耳有毛細胞保護薬剤; エクソソーム

2022年度は、2021年度に引き続き、実験１の器官培養コルチ器へのシスプラチン投与に対する内耳有毛細胞保護効果の検討のうち、コルチ器の器官培養および共焦点レーザー顕微鏡およびLEICAレーザー顕微鏡にて観察を行い、器管培養が行われていることを確認した。コルチ器によっては、一部重なっているものやlateral wallが残っているものはあるが、昨年度より技術が向上し、細胞の評価が可能なレベルへと到達した。しかし、評価実験を行っていく上で、さらなる時間的なスピードの改善ならびに精度を高めていく必要がある。また、治療薬剤の内耳有毛細胞保護効果実験のまえに、CDDPの至適濃度の設定を行うために、異なるCDDP濃度とコントロールをもちいた、コルチ器の器官培養および共焦点レーザー顕微鏡による観察をおこなった。30μmol/L CDDP濃度が、蝸牛basal turn, middle turn共に有毛細胞の障害を認め至適濃度と判断した。実験１－2)シスプラチンと候補薬剤の投与の準備として、候補薬剤である、Vitamin E、Melatonin、Edaravone、GMDTC、βヒドロキシ酪酸、ヒト臍帯由来間葉系幹細胞エクソソーム(hucMSC-ex)などの他に候補薬剤がないかどうか文献的検索を行い、アミノグリコシドによる湯毛細胞障害にたいして保護作用の確認されている半夏瀉心湯等を候補薬剤として選出した。また、半夏瀉心湯における内耳保護効果治療実験へむけて、抽出方法、至適濃度の選定を文献的に行い決定した。

继2021财年之后，2022财年，我们将研究实验1中培养的柯蒂器官因给予顺铂而产生的内耳毛细胞的保护作用，并将进行柯蒂器官的器官培养和使用共聚焦激光的观察显微镜和LEICA激光显微镜证实进行了器官培养。根据柯蒂氏器官的不同，可能会残留一些重叠或侧壁，但自去年以来技术已有所改进，已达到可以评估细胞的水平。然而，在进行评估实验时，需要进一步提高时间速度并提高准确性。此外，为了在测试治疗药物对内耳毛细胞的保护作用之前确定CDDP的最佳浓度，我们使用不同的CDDP浓度和对照I进行了柯蒂氏器的器官培养并使用共聚焦激光显微镜观察。做到了。 30μmol/L的CDDP浓度被认为是最佳浓度，因为观察到耳蜗基转和中转的毛细胞均受到损伤。实验1-2)准备顺铂和候选药物的给药，除了候选药物如维生素E、褪黑素、依达拉奉、GMDTC、β-羟基丁酸和人脐带源间充质干细胞外泌体(hucMSC-ex ）我们进行了文献检索，看看是否有候选药物，并选择了已被证明对氨基糖苷类引起的毛细胞损伤具有保护作用的Hankashashinto作为候选药物。此外，为了准备Hankashashinto内耳保护作用的治疗实验，根据文献确定了提取方法和最佳浓度。