血管内皮細胞機能の補完は腸管虚血の予後を改善するか：新規マウス虚血モデルでの検討

血管内皮细胞功能的补充能否改善肠缺血的预后：新的小鼠缺血模型的检查

• 批准号: 21K09023
• 负责人: 林 美鈴
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09023/
• 关键词: 腸管虚血再灌流障害; 一酸化窒素; 糖尿病; 血管内皮; 腸管虚血

マウス腸管虚血再灌流障害を野生型及び肥満・糖尿病型マウスにおいて作成し、肥満・糖尿病型マウスが術後48時間の死亡率75%をきたす虚血時間での虚血再灌流をおこなった。再灌流後４時間で採取した小腸組織を用いて組織学的評価をおこなった。小腸粘膜スコアは腸管虚血群とsham手術群の間で有意差を認めたが、肥満・糖尿病型マウス及び野生型マウスの比較では、小腸粘膜損傷スコアは、有意差を認めなかった。小腸組織および、腸管虚血再灌流障害の重症度に関連するとされる肺障害・肝障害について、分子生物学的検討（ウエスタンブロット法、PCR法）を実施した。腸管血流量低下に関係すると思われるNO合成酵素や炎症性サイトカインの発現量をターゲットとして小腸組織に関して検討を行ったが、有意な差を認めなかった。虚血臓器にある小腸は、再灌流４時間後の組織学的・分子生物学的検討のいずれにおいても、肥満・糖尿病型と野生型の間で差は見られない、という結果を得た。遠隔臓器である肺・肝について先行研究の結果を参考に炎症性サイトカインの発現量の差を検討したが、有意な差を認めなかった。いずれの組織においてもサンプル採取時間が適切でない可能性があり、また、小腸組織に関しては、障害粘膜上皮が管腔内に剥脱し採取サンプル内に残存していない可能性も考えられた。サンプル採取時期・手法の変更を検討中である。前年度、亜硝酸ナトリウム水溶液飲水による生存率改善をN=6で検討したが、腸管虚血再灌流障害について検討した先行研究ではN=20-30に設定して検討したものが多い。死亡率が低下する傾向を示した亜硝酸ナトリウム水溶液濃度についてマウスのNを増やし再検討したが、再度、有意差を認めなかった。

在野生型和肥胖/糖尿病小鼠中造成小鼠肠道缺血再灌注损伤，肥胖/糖尿病小鼠在缺血期间进行缺血再灌注，导致术后48小时内死亡率75%。使用再灌注后4小时收集的小肠组织进行组织学评估。虽然肠缺血组与假手术组的小肠黏膜评分存在显着差异，但肥胖/糖尿病小鼠与野生型小鼠的小肠黏膜损伤评分无显着差异。对小肠组织以及肺和肝脏疾病进行了分子生物学研究（蛋白质印迹法、PCR），这些疾病被认为与肠缺血再灌注损伤的严重程度有关。我们研究了小肠中NO合酶和炎症细胞因子的表达水平，这被认为与肠道血流量减少有关，但没有观察到显着差异。对于位于缺血器官的小肠，再灌注4小时后的组织学和分子生物学检查显示，肥胖/糖尿病型与野生型之间没有差异。根据之前的研究结果，我们检查了远处器官（例如肺和肝脏）中炎症细胞因子表达水平的差异，但没有发现显着差异。有可能样品采集时间对于任何组织都不合适，对于小肠组织，也有可能受损的粘膜上皮脱落到管腔中，没有保留在采集的样品中。我们目前正在考虑改变样本采集时间和方法。去年，我们研究了饮用N=6的亚硝酸钠水溶液对生存率的改善，但之前许多研究肠道缺血再灌注损伤的研究都设定N=20-30。我们重新检查了亚硝酸钠水溶液的浓度，发现通过增加小鼠的氮，死亡率有降低的趋势，但再次没有观察到显着差异。