統合的ストレス応答が敗血症関連脳障害に果たす役割の解明

阐明综合应激反应在脓毒症相关脑损伤中的作用

• 批准号: 21K08917
• 负责人: 森本 裕二
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08917/
• 关键词: 統合的ストレス応答; 敗血症関連脳障害; 敗血症; 認知機能低下

我々の目的は、敗血症モデルマウスを用いて敗血症性脳症(SAE)における統合的ストレス応答(ISR)の関与、ISRを制御する薬剤であるISRIBの効果について検討することである。初年度は、本研究に適した動物モデルの作成を試みた。2年度目は、行動学実験から一度離れ、敗血症罹患後の海馬におけるISR活性化を調べることとした。方法としては、盲腸結紮穿刺（CLP）モデルを使用し、ISR活性化で発現量が増加すると報告されているタンパクである、P-eIF2α、ATF4、CHOPの発現量をWestern blot法を用いて測定した。Western blot法によりP-eIF2α、eIF2αの発現を検出し、P-eIF2α/eIF2αを測定した。当初は先行研究でも使用していた蛍光Western blot法を用いて検出を試みたが、条件等の調節を行なっても検出力が足りず、P-eIF2αの検出が困難であった。化学発光Western blot法に変更したところ、感度が上がり、P-eIF2α、eIF2αを検出することができた。盲腸結紮穿刺（CLP）後24時間で、eIF2αは上昇が認められたが、P-eIF2αに上昇がなく、予想した結果と異なるものであった。ただし、eIF2αのバンドには下向きのスメアが発生しており、タンパクが分解した可能性が否定できないと考えた。海馬サンプルの蛋白溶解方法や、破砕方法、Western blot法の電気泳動、転写等の条件変更等を行なったが結果は同様であった。そこで、ISR活性化で上昇が予想されるATF4、CHOPなど別のタンパクの検出を試みた。いずれもCLP後24時間での上昇を認めなかった。CLP後遠隔期でのISR活性化の可能性も考えて、CLP後１週間でも同様のタンパクP-eIF2α、eIF2α、ATF4、CHOPを検出したが、CLP群での上昇を認めなかった。

我们的目的是使用脓毒症模型小鼠研究综合应激反应 (ISR) 在脓毒症脑病 (SAE) 中的作用以及 ISRIB（一种控制 ISR 的药物）的作用。第一年，我们尝试创建适合这项研究的动物模型。第二年，我们决定暂停行为实验，研究败血症后海马体中 ISR 的激活情况。作为一种方法，我们使用盲肠结扎穿刺（CLP）模型，并使用蛋白质印迹法测量了P-eIF2α、ATF4和CHOP的表达水平，据报道这些蛋白质的表达水平随着ISR激活而增加。做过。采用Western blotting检测P-eIF2α和eIF2α的表达，并测定P-eIF2α/eIF2α。最初尝试使用先前研究中使用的荧光Western blot方法进行检测，但即使调整条件后，检测能力仍不足，难以检测P-eIF2α。当我们改为化学发光Western blot方法时，灵敏度提高，我们能够检测到P-eIF2α和eIF2α。盲肠结扎穿刺（CLP）后24小时，观察到eIF2α增加，但P-eIF2α没有增加，这与预期结果不同。但eIF2α条带出现向下拖影，我们认为不能排除该蛋白被降解的可能性。虽然我们改变了海马样本的蛋白溶解方法、破碎方法、Western blot电泳、转移条件等，但结果是相同的。因此，我们尝试检测其他蛋白质，例如 ATF4 和 CHOP，这些蛋白质预计会在 ISR 激活后增加。 CLP 后 24 小时，两种情况均未观察到增加。考虑到CLP后较远时期ISR激活的可能性，CLP后1周检测到类似蛋白P-eIF2α、eIF2α、ATF4和CHOP，但在CLP组中未观察到增加。