維代培養細胞を用いた虚血性神経細胞障害の機序及び各種薬物の保護的効果に関する検討-フローサイトメリ-法による解析-

利用培养细胞研究缺血性神经元损伤的机制及各种药物的保护作用-流式细胞术分析-

基本信息

批准号：
06771177
负责人：
森本裕二
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.虚血性神経細胞障害時の細胞内Ca^<2+>上昇の機序とその意義:NG108-15細胞に低酸素無グルコース負荷により虚血性侵襲を与え、細胞外Ca^<2+>除去および細胞内Ca^<2+>キレート剤であるBAPTA-AM添加時の生存率をフローサイトメトリーにより測定した。その結果、単に虚血性侵襲のみを加えた場合と比較して、これら負荷時の生存率に有意な増加を認めなかった。したがって、低酸素無グルコース負荷によるNG108-15細胞障害の機序に、細胞内外からのCa^<2+>流入は重要な役割を演じないと結論した。2.神経虚血に付随するアシドーシスの影響とその機序:NG108-15細胞を種々の程度のアシドーシス下におき、低酸素無グルコース負荷により虚血性侵襲を与えた。その結果pH6.8からpH5.6の間で、pH7.4と比較して生存率の増加を認め、その増加率はpH6.2で最大であった。すなわち、この程度のアシドーシスは虚血性侵襲に対して保護効果を有することが明らかとなった。さらに、この保護効果の機序につきCa^<2+>動態と細胞内エネルギー保存の両面から検討を加えた。その結果後者が重要な機序となる可能性が示唆された。また乳酸アシドーシス単独の細胞浮腫と生存率に及ぼす影響についても検討を行った。この結果、生存率低下はpH、乳酸濃度依存性に起こるが細胞浮腫は非依存性であり浮腫が細胞障害の直接的原因ではないと結論した。3.虚血後の酸素負荷の影響とその機序:低酸素無グルコース負荷後の純酸素と大気それぞれに暴露した2群を設定し、その生存率を比較したが有意差は認めなかった。4.薬物の影響については、L型Ca^<2+>チャネル拮抗剤であるニカルジピンは生存率に対して効果を認めなかった。乳酸アシドーシスによる細胞浮腫に対して、浸透圧利尿薬やループ利尿薬と比較してNa^+/H^+交換阻害薬に最も抗浮腫効果を認めた。

1.缺血性神经元损伤时细胞内Ca^<2+>增加的机制和意义：缺氧葡萄糖负荷对NG108-15细胞的缺血攻击增加了细胞外Ca^<2+>去除和添加BAPTA后的存活率-AM，一种细胞内Ca 2+ 螯合剂，通过流式细胞术测量。结果，与仅应用缺血性损伤时相比，在这些挑战下没有观察到存活率显着增加。因此，我们得出结论，细胞内外的Ca^2+内流在无缺氧葡萄糖负荷引起的NG108-15细胞损伤机制中并没有发挥重要作用。 2.与神经缺血相关的酸中毒的影响和机制：将NG108-15细胞置于不同程度的酸中毒下，并通过缺氧无葡萄糖负荷进行缺血性损伤。结果，与pH 7.4相比，在pH 6.8和pH 5.6之间观察到存活率增加，并且在pH 6.2时增加率最大。换句话说，已经揭示这种程度的酸中毒具有针对缺血性侵袭的保护作用。此外，我们从Ca^2+动力学和细胞内能量守恒研究了这种保护作用的机制。结果表明，后者可能是一个重要的机制。我们还研究了单独乳酸酸中毒对细胞水肿和存活率的影响。结果得出结论，存活率的降低取决于pH和乳酸浓度，但与细胞水肿无关，并且水肿不是细胞损伤的直接原因。 3.缺血后氧负荷的影响及其机制：设置两组，在缺氧无葡萄糖负荷后分别暴露于纯氧和空气中，比较其存活率，但未观察到显着差异。 4、药物作用方面，L型Ca^2+通道拮抗剂尼卡地平对生存率无影响。与渗透性利尿剂和袢利尿剂相比，发现Na^+/H^+交换抑制剂对乳酸性酸中毒引起的细胞水肿具有最大的抗水肿作用。